-
Αιθέριο έλαιο από φύλλα ευκαλύπτου αρωματοθεραπείας για την περιποίηση του δέρματος και του σώματος
Μέθοδος εκχύλισης ή επεξεργασίας: απόσταξη με ατμό
Μέρος εκχύλισης απόσταξης: φύλλο
Προέλευση χώρας: Κίνα
Εφαρμογή: Διάχυτη/αρωματοθεραπεία/μασάζ
Διάρκεια ζωής: 3 χρόνια
Προσαρμοσμένη υπηρεσία: προσαρμοσμένη ετικέτα και κουτί ή ως απαίτηση σας
Πιστοποίηση: GMPC/FDA/ISO9001/MSDS/COA
Το έλαιο ευκαλύπτου αντιδρά με τη βλέννα και την χαλαρώνει, προσφέροντας άμεση ανακούφιση από τη δύσπνοια και άλλα αναπνευστικά προβλήματα. Είναι αρκετά ισχυρό ώστε να λειτουργεί ως εντομοαπωθητικό. Όταν χρησιμοποιείται στην αρωματοθεραπεία, προσφέρει διαύγεια σκέψης. Τα θεραπευτικά του οφέλη οφείλονται στις αντιμικροβιακές, αντιβακτηριακές, αντισηπτικές, αντισπασμωδικές και αντιικές του ιδιότητες. Χρησιμοποιήστε το έλαιο ευκαλύπτου για μια ποικιλία δερματικών και παθήσεων. Περιέχει ευκαλυπτόλη, η οποία είναι επίσης γνωστή ως κινεόλη. Αυτή η ένωση θα υποστηρίξει τη συνολική υγεία και ευεξία σας.
-
Φυσικό καθαρό βιολογικό αιθέριο έλαιο λεβάντας για την περιποίηση του δέρματος με αρωματοθεραπεία
Μέθοδος εκχύλισης ή επεξεργασίας:Απόσταξη με ατμό
Μέρος εκχύλισης απόσταξης: Λουλούδι
Προέλευση χώρας: Κίνα
Εφαρμογή: Διάχυτη/αρωματοθεραπεία/μασάζ
Διάρκεια ζωής: 3 χρόνια
Προσαρμοσμένη υπηρεσία: προσαρμοσμένη ετικέτα και κουτί ή ως απαίτηση σας
Πιστοποίηση: GMPC/FDA/ISO9001/MSDS/COA
-
100% καθαρό φυσικό οργανικό αιθέριο έλαιο Magnoliae Officmalis Cortex Oil για περιποίηση δέρματος
Το άρωμα του Hou Po είναι αμέσως πικρό και έντονα πικάντικο, και στη συνέχεια σταδιακά ανοίγει με μια βαθιά, σιροπιώδη γλυκύτητα και ζεστασιά.
Το Χου Πο έχει συγγένεια με τα στοιχεία της Γης και του Μετάλλου, όπου η πικρή ζεστασιά του δρα έντονα για την κάθοδο του Τσι και της ξηρής υγρασίας. Λόγω αυτών των ιδιοτήτων, χρησιμοποιείται στην κινεζική ιατρική για την ανακούφιση από τη στασιμότητα και τη συσσώρευση στο πεπτικό σύστημα, καθώς και από τον βήχα και το συριγμό λόγω φλέγματος που εμποδίζει τους πνεύμονες.
Η Magnolia Officinials είναι ένα φυλλοβόλο δέντρο που προέρχεται από τα βουνά και τις κοιλάδες των επαρχιών Σετσουάν, Χουμπέι και άλλων επαρχιών της Κίνας. Ο εξαιρετικά αρωματικός φλοιός που χρησιμοποιείται στην παραδοσιακή κινεζική ιατρική αφαιρείται από τους μίσχους, τα κλαδιά και τις ρίζες. Συλλέγεται από τον Απρίλιο έως τον Ιούνιο. Ο παχύς, λείος φλοιός, πλούσιος σε λάδι, έχει μοβ χρώμα στην εσωτερική πλευρά με μια κρυστάλλινη λάμψη.
Οι επαγγελματίες μπορούν να εξετάσουν το ενδεχόμενο συνδυασμού του Hou Po με αιθέριο έλαιο Qing Pi ως κορυφαίο συμπλήρωμα σε μείγματα που στοχεύουν στη διάσπαση των συσσωρεύσεων.
-
Προσαρμοσμένη συσκευασία OEM Φυσικό έλαιο ριζώματος μακροκεφαλίας
Ως αποτελεσματικός χημειοθεραπευτικός παράγοντας, η 5-φθοροουρακίλη (5-FU) εφαρμόζεται ευρέως για τη θεραπεία κακοήθων όγκων στο γαστρεντερικό σωλήνα, την κεφαλή, τον τράχηλο, το στήθος και τις ωοθήκες. Και η 5-FU είναι το φάρμακο πρώτης γραμμής για τον καρκίνο του παχέος εντέρου στην κλινική πράξη. Ο μηχανισμός δράσης της 5-FU είναι να μπλοκάρει τον μετασχηματισμό του νουκλεϊκού οξέος ουρακίλης σε νουκλεϊκό οξύ θυμίνης στα καρκινικά κύτταρα και στη συνέχεια να επηρεάσει τη σύνθεση και την επιδιόρθωση του DNA και του RNA για να επιτύχει την κυτταροτοξική της δράση (Afzal et al., 2009; Ducreux et al., 2015; Longley et al., 2003). Ωστόσο, η 5-FU προκαλεί επίσης διάρροια που προκαλείται από χημειοθεραπεία (CID), μία από τις πιο συχνές ανεπιθύμητες ενέργειες που ταλαιπωρούν πολλούς ασθενείς (Filho et al., 2016). Η συχνότητα εμφάνισης διάρροιας σε ασθενείς που έλαβαν 5-FU ήταν έως και 50%-80%, γεγονός που επηρέασε σοβαρά την πρόοδο και την αποτελεσματικότητα της χημειοθεραπείας (Iacovelli et al., 2014; Rosenoff et al., 2006). Συνεπώς, είναι εξαιρετικά σημαντικό να βρεθεί αποτελεσματική θεραπεία για την CID που προκαλείται από 5-FU.
Προς το παρόν, οι μη φαρμακευτικές και οι φαρμακευτικές παρεμβάσεις έχουν εισαχθεί στην κλινική θεραπεία της CID. Οι μη φαρμακευτικές παρεμβάσεις περιλαμβάνουν μια λογική διατροφή και συμπληρώματα με αλάτι, ζάχαρη και άλλα θρεπτικά συστατικά. Φάρμακα όπως η λοπεραμίδη και η οκτρεοτίδη χρησιμοποιούνται συνήθως στη θεραπεία της CID κατά της διάρροιας (Benson et al., 2004). Επιπλέον, εθνοϊατρικά χρησιμοποιούνται επίσης για τη θεραπεία της CID με τη δική τους μοναδική θεραπεία σε διάφορες χώρες. Η Παραδοσιακή Κινεζική Ιατρική (ΠΚΙ) είναι μια τυπική εθνοϊατρική που εφαρμόζεται για περισσότερα από 2000 χρόνια σε χώρες της Ανατολικής Ασίας, συμπεριλαμβανομένης της Κίνας, της Ιαπωνίας και της Κορέας (Qi et al., 2010). Η ΠΚΙ υποστηρίζει ότι τα χημειοθεραπευτικά φάρμακα θα προκαλέσουν κατανάλωση Qi, ανεπάρκεια σπλήνα, δυσαρμονία στομάχου και ενδοφυτική υγρασία, με αποτέλεσμα αγώγιμη δυσλειτουργία των εντέρων. Στη θεωρία της ΠΚΙ, η στρατηγική θεραπείας της CID θα πρέπει να βασίζεται κυρίως στη συμπλήρωση του Qi και στην ενίσχυση του σπλήνα (Wang et al., 1994).
Οι αποξηραμένες ρίζες τουAtractylodes macrocephalaΚόιτζ. (ΠΜ) καιPanax ginsengΤα CA Mey. (PG) είναι τα τυπικά φυτικά φάρμακα στην Παραδοσιακή Κινεζική Ιατρική με τα ίδια αποτελέσματα συμπλήρωσης του Qi και ενδυνάμωσης του σπλήνα (Li et al., 2014). Τα AM και PG χρησιμοποιούνται συνήθως ως ζεύγος βοτάνων (η απλούστερη μορφή κινεζικής βοτανικής συμβατότητας) με τα αποτελέσματα της συμπλήρωσης του Qi και ενδυνάμωσης του σπλήνα για τη θεραπεία της διάρροιας. Για παράδειγμα, τα AM και PG έχουν τεκμηριωθεί σε κλασικές αντιδιαρροϊκές φόρμουλες όπως τα Shen Ling Bai Zhu San, Si Jun Zi Tang απόTaiping Huimin Heji Ju Fang(Δυναστεία Song, Κίνα) και Bu Zhong Yi Qi Tang απόΠι Γουέι Λουν(Δυναστεία Γιουάν, Κίνα) (Εικ. 1). Αρκετές προηγούμενες μελέτες είχαν αναφέρει ότι και οι τρεις τύποι έχουν την ικανότητα να ανακουφίζουν από τη ΧΕΙ (Bai et al., 2017; Chen et al., 2019; Gou et al., 2016). Επιπλέον, η προηγούμενη μελέτη μας έδειξε ότι η κάψουλα Shenzhu, η οποία περιέχει μόνο AM και PG, έχει πιθανές επιδράσεις στις θεραπείες της διάρροιας, της κολίτιδας (σύνδρομο xiexie) και άλλων γαστρεντερικών παθήσεων (Feng et al., 2018). Ωστόσο, καμία μελέτη δεν έχει συζητήσει την επίδραση και τον μηχανισμό της AM και της PG στη θεραπεία της ΧΕΙ, είτε σε συνδυασμό είτε μόνες τους.
Πλέον, η εντερική μικροχλωρίδα θεωρείται πιθανός παράγοντας για την κατανόηση του θεραπευτικού μηχανισμού της παραδοσιακής κινεζικής ιατρικής (ΠΚΙ) (Feng et al., 2019). Σύγχρονες μελέτες δείχνουν ότι η εντερική μικροχλωρίδα παίζει κρίσιμο ρόλο στη διατήρηση της εντερικής ομοιόστασης. Η υγιής εντερική μικροχλωρίδα συμβάλλει στην προστασία του εντερικού βλεννογόνου, στον μεταβολισμό, στην ανοσολογική ομοιόσταση και απόκριση, και στην καταστολή των παθογόνων (Thursby and Juge, 2017; Pickard et al., 2017). Η διαταραγμένη εντερική μικροχλωρίδα επηρεάζει άμεσα ή έμμεσα τις φυσιολογικές και ανοσολογικές λειτουργίες του ανθρώπινου σώματος, προκαλώντας παρενέργειες όπως η διάρροια (Patel et al., 2016; Zhao and Shen, 2010). Έρευνες έχουν δείξει ότι η 5-FU άλλαξε σημαντικά τη δομή της εντερικής μικροχλωρίδας σε ποντίκια με διάρροια (Li et al., 2017). Επομένως, οι επιδράσεις της π.μ. και της μ.μ. στη διάρροια που προκαλείται από την 5-FU μπορεί να προκαλούνται από την εντερική μικροχλωρίδα. Ωστόσο, παραμένει άγνωστο εάν η AM και η PG μόνα τους και σε συνδυασμό θα μπορούσαν να αποτρέψουν τη διάρροια που προκαλείται από 5-FU τροποποιώντας το εντερικό μικροβίωμα.
Προκειμένου να διερευνήσουμε τις αντιδιαρροϊκές επιδράσεις και τον υποκείμενο μηχανισμό της AM και της PG, χρησιμοποιήσαμε 5-FU για να προσομοιώσουμε ένα μοντέλο διάρροιας σε ποντίκια. Εδώ, εστιάσαμε στις πιθανές επιδράσεις της εφάπαξ και συνδυασμένης χορήγησης (AP)Atractylodes macrocephalaαιθέριο έλαιο (AMO) καιPanax ginsengολικές σαπωνίνες (PGS), τα δραστικά συστατικά που εξάγονται αντίστοιχα από την AM και την PG, σε διάρροια, εντερική παθολογία και μικροβιακή δομή μετά από χημειοθεραπεία με 5-FU.
-
100% καθαρό φυσικό αιθέριο έλαιο Eucommiae Foliuml για περιποίηση δέρματος
Ευκομμία ουλμοειδής(EU) (κοινώς ονομαζόμενα «Du Zhong» στην κινεζική γλώσσα) ανήκουν στην οικογένεια Eucommiaceae, ένα γένος μικρού δέντρου που προέρχεται από την Κεντρική Κίνα [1]. Αυτό το φυτό καλλιεργείται ευρέως στην Κίνα σε μεγάλη κλίμακα λόγω της φαρμακευτικής του σημασίας. Περίπου 112 ενώσεις έχουν απομονωθεί από την ΕΕ, οι οποίες περιλαμβάνουν λιγνάνες, ιριδοειδή, φαινολικά, στεροειδή και άλλες ενώσεις. Η συμπληρωματική βοτανική σύνθεση αυτού του φυτού (όπως το νόστιμο τσάι) έχει δείξει ορισμένες φαρμακευτικές ιδιότητες. Το φύλλο της ΕΕ έχει υψηλότερη δραστηριότητα που σχετίζεται με τον φλοιό, τα άνθη και τους καρπούς [2,3]. Έχει αναφερθεί ότι τα φύλλα της ΕΕ ενισχύουν την αντοχή των οστών και τους μύες του σώματος [4], οδηγώντας έτσι στη μακροζωία και προάγοντας τη γονιμότητα στους ανθρώπους [5]. Η νόστιμη φόρμουλα τσαγιού που παρασκευάζεται από το φύλλο της ΕΕ έχει αναφερθεί ότι μειώνει την λιπαρότητα και ενισχύει τον μεταβολισμό της ενέργειας. Οι φλαβονοειδείς ενώσεις (όπως η ρουτίνη, το χλωρογενικό οξύ, το φερουλικό οξύ και το καφεϊκό οξύ) έχουν αναφερθεί ότι εμφανίζουν αντιοξειδωτική δράση στα φύλλα της ΕΕ [6].
Παρόλο που υπάρχει επαρκής βιβλιογραφία σχετικά με τις φυτοχημικές ιδιότητες της ΕΕ, υπάρχουν λίγες μελέτες σχετικά με τις φαρμακολογικές ιδιότητες των διαφόρων ενώσεων που εξάγονται από τους φλοιούς, τους σπόρους, τους μίσχους και τα φύλλα της ΕΕ. Αυτή η ανασκόπηση θα διευκρινίσει λεπτομερείς πληροφορίες σχετικά με τις διαφορετικές ενώσεις που εξάγονται από τα διάφορα μέρη (φλοιούς, σπόρους, μίσχο και φύλλο) της ΕΕ και τις πιθανές χρήσεις αυτών των ενώσεων σε ιδιότητες που προάγουν την υγεία με επιστημονικά δεδομένα και, ως εκ τούτου, θα παρέχει ένα υλικό αναφοράς για την εφαρμογή της ΕΕ.
-
Αγνό φυσικό έλαιο Houttuynia cordata Έλαιο Houttuynia Cordata Έλαιο Lchthammolum
Στις περισσότερες αναπτυσσόμενες χώρες, το 70-95% του πληθυσμού βασίζεται σε παραδοσιακά φάρμακα για την πρωτοβάθμια υγειονομική περίθαλψη και από αυτά το 85% των ανθρώπων χρησιμοποιεί φυτά ή τα εκχυλίσματά τους ως δραστική ουσία.1] Η αναζήτηση νέων βιολογικά δραστικών ενώσεων από φυτά εξαρτάται συνήθως από τις συγκεκριμένες εθνοτικές και λαογραφικές πληροφορίες που λαμβάνονται από τους τοπικούς επαγγελματίες και εξακολουθεί να θεωρείται σημαντική πηγή για την ανακάλυψη φαρμάκων. Στην Ινδία, περίπου 2000 φάρμακα είναι φυτικής προέλευσης.[2] Λόγω του εκτεταμένου ενδιαφέροντος για τη χρήση φαρμακευτικών φυτών, η παρούσα ανασκόπησηHouttuynia cordataΤο Thunb. παρέχει ενημερωμένες πληροφορίες με αναφορά σε βοτανικές, εμπορικές, εθνοφαρμακολογικές, φυτοχημικές και φαρμακολογικές μελέτες που εμφανίζονται στη βιβλιογραφία.H. cordataΤο Thunb. ανήκει στην οικογένειαΣαουροειδήκαι είναι κοινώς γνωστό ως κινέζικη ουρά σαύρας. Είναι ένα πολυετές βότανο με στολονιοφόρο ρίζωμα που έχει δύο διακριτούς χημειοτύπους.3,4] Ο κινεζικός χημειότυπος του είδους βρίσκεται σε άγριες και ημιάγριες συνθήκες στη βορειοανατολική Ινδία από τον Απρίλιο έως τον Σεπτέμβριο.[5,6,7]H. cordataΔιατίθεται στην Ινδία, ειδικά στην κοιλάδα Βραχμαπούτρα του Άσαμ και χρησιμοποιείται παραδοσιακά από διάφορες φυλές του Άσαμ με τη μορφή λαχανικών καθώς και για διάφορους ιατρικούς σκοπούς.
-
100% καθαρό λάδι Arctium lappa Κατασκευαστής – Φυσικό λάδι Arctium lappa με λάιμ και πιστοποιητικά διασφάλισης ποιότητας
Οφέλη για την υγεία
Η ρίζα του κολλιτσίδα τρώγεται συχνά, ωστόσο μπορεί επίσης να αποξηρανθεί και να μουλιαστεί σε τσάι. Λειτουργεί καλά ως πηγή ινουλίνης, μιαςπρεβιοτικόφυτικές ίνες που βοηθούν στην πέψη και βελτιώνουν την υγεία του εντέρου. Επιπλέον, αυτή η ρίζα περιέχει φλαβονοειδή (φυτικά θρεπτικά συστατικά),φυτοχημικάκαι αντιοξειδωτικά που είναι γνωστό ότι έχουν οφέλη για την υγεία.
Επιπλέον, η ρίζα του burdock μπορεί να προσφέρει και άλλα οφέλη όπως:
Μείωση της χρόνιας φλεγμονής Η ρίζα της κολλιτσίδας περιέχει μια σειρά από αντιοξειδωτικά, όπως η κερσετίνη, τα φαινολικά οξέα και η λουτεολίνη, τα οποία μπορούν να βοηθήσουν στην προστασία των κυττάρων σας απόελεύθερες ρίζεςΑυτά τα αντιοξειδωτικά βοηθούν στη μείωση της φλεγμονής σε όλο το σώμα.
Κίνδυνοι για την υγεία
Η ρίζα κολλιτσίδας θεωρείται ασφαλής για κατανάλωση ή πόση ως τσάι. Ωστόσο, αυτό το φυτό μοιάζει πολύ με τα φυτά μπελαντόνα, τα οποία είναι τοξικά. Συνιστάται να αγοράζετε ρίζα κολλιτσίδας μόνο από αξιόπιστους πωλητές και να μην τη συλλέγετε μόνοι σας. Επιπλέον, υπάρχουν ελάχιστες πληροφορίες σχετικά με τις επιπτώσεις της σε παιδιά ή έγκυες γυναίκες. Συζητήστε με το γιατρό σας πριν χρησιμοποιήσετε ρίζα κολλιτσίδας σε παιδιά ή εάν είστε έγκυος.
Ακολουθούν ορισμένοι άλλοι πιθανοί κίνδυνοι για την υγεία που πρέπει να λάβετε υπόψη εάν χρησιμοποιείτε ρίζα κολλιτσίδας:
Αυξημένη αφυδάτωση
Η ρίζα κολλιτσίδας δρα σαν φυσικό διουρητικό, το οποίο μπορεί να οδηγήσει σε αφυδάτωση. Εάν παίρνετε χάπια νερού ή άλλα διουρητικά, δεν πρέπει να παίρνετε ρίζα κολλιτσίδας. Εάν παίρνετε αυτά τα φάρμακα, είναι σημαντικό να γνωρίζετε άλλα φάρμακα, βότανα και συστατικά που μπορεί να οδηγήσουν σε αφυδάτωση.
Αλλεργική αντίδραση
Εάν είστε ευαίσθητοι ή έχετε ιστορικό αλλεργικών αντιδράσεων σε μαργαρίτες, αμβροσία ή χρυσάνθεμα, διατρέχετε αυξημένο κίνδυνο αλλεργικής αντίδρασης στη ρίζα του κολλιτσίδα.
-
Χονδρική τιμή χονδρικής 100% καθαρό έλαιο AsariRadix Et Rhizoma Relax Aromatherapy Eucalyptus globulus
Μελέτες σε ζώα και in vitro έχουν διερευνήσει τις πιθανές αντιμυκητιασικές, αντιφλεγμονώδεις και καρδιαγγειακές επιδράσεις του σασσάφρου και των συστατικών του. Ωστόσο, δεν υπάρχουν κλινικές δοκιμές και το σασσάφρου δεν θεωρείται ασφαλές για χρήση. Η σαφρόλη, το κύριο συστατικό του φλοιού και του ελαίου της ρίζας του σασσάφρου, έχει απαγορευτεί από την Υπηρεσία Τροφίμων και Φαρμάκων των ΗΠΑ (FDA), συμπεριλαμβανομένης της χρήσης ως αρωματική ουσία ή άρωμα, και δεν πρέπει να χρησιμοποιείται εσωτερικά ή εξωτερικά, καθώς είναι δυνητικά καρκινογόνο. Η σαφρόλη έχει χρησιμοποιηθεί στην παράνομη παραγωγή 3,4-μεθυλενο-διοξυμεθαμφεταμίνης (MDMA), γνωστής και με τα ονόματα "ecstasy" ή "Molly", και η πώληση σαφρόλης και ελαίου σασσάφρου παρακολουθείται από την Υπηρεσία Δίωξης Ναρκωτικών των ΗΠΑ.
-
Χονδρική τιμή χονδρικής 100% καθαρό αιθέριο έλαιο Stellariae Radix (νέο) Relax Aromatherapy Eucalyptus globulus
Η Κινεζική Φαρμακοποιία (έκδοση 2020) απαιτεί το εκχύλισμα μεθανόλης του YCH να μην είναι μικρότερο από 20,0% [2], χωρίς να έχουν καθοριστεί άλλοι δείκτες αξιολόγησης ποιότητας. Τα αποτελέσματα αυτής της μελέτης δείχνουν ότι η περιεκτικότητα των εκχυλισμάτων μεθανόλης των άγριων και των καλλιεργημένων δειγμάτων πληρούσε και τα δύο το πρότυπο της φαρμακοποιίας και δεν υπήρχε σημαντική διαφορά μεταξύ τους. Επομένως, δεν υπήρχε εμφανής διαφορά ποιότητας μεταξύ άγριων και καλλιεργημένων δειγμάτων, σύμφωνα με αυτόν τον δείκτη. Ωστόσο, η περιεκτικότητα σε συνολικές στερόλες και συνολικά φλαβονοειδή στα άγρια δείγματα ήταν σημαντικά υψηλότερη από εκείνη στα καλλιεργημένα δείγματα. Περαιτέρω μεταβολομική ανάλυση αποκάλυψε άφθονη ποικιλομορφία μεταβολιτών μεταξύ των άγριων και των καλλιεργημένων δειγμάτων. Επιπλέον, εξετάστηκαν 97 σημαντικά διαφορετικοί μεταβολίτες, οι οποίοι παρατίθενται στοΣυμπληρωματικός Πίνακας S2Μεταξύ αυτών των σημαντικά διαφορετικών μεταβολιτών είναι η β-σιτοστερόλη (ID είναι M397T42) και τα παράγωγα κερσετίνης (M447T204_2), τα οποία έχουν αναφερθεί ως δραστικά συστατικά. Συστατικά που δεν είχαν αναφερθεί προηγουμένως, όπως η τριγονελίνη (M138T291_2), η βεταΐνη (M118T277_2), η φουστίνα (M269T36), η ροτενόνη (M241T189), η αρκτινίνη (M557T165) και το λογανικό οξύ (M399T284_2), συμπεριλήφθηκαν επίσης στους διαφορικούς μεταβολίτες. Αυτά τα συστατικά παίζουν διάφορους ρόλους στην αντιοξειδωτική, αντιφλεγμονώδη, την απομάκρυνση των ελεύθερων ριζών, την αντικαρκινική και τη θεραπεία της αθηροσκλήρωσης και, ως εκ τούτου, θα μπορούσαν να αποτελέσουν πιθανά νέα δραστικά συστατικά στην YCH. Η περιεκτικότητα σε δραστικά συστατικά καθορίζει την αποτελεσματικότητα και την ποιότητα των φαρμακευτικών υλικών [7]. Συνοψίζοντας, το εκχύλισμα μεθανόλης ως ο μόνος δείκτης αξιολόγησης ποιότητας YCH έχει ορισμένους περιορισμούς και πιο συγκεκριμένοι δείκτες ποιότητας πρέπει να διερευνηθούν περαιτέρω. Υπήρξαν σημαντικές διαφορές στις συνολικές στερόλες, τα συνολικά φλαβονοειδή και την περιεκτικότητα πολλών άλλων διαφορικών μεταβολιτών μεταξύ της άγριας και της καλλιεργημένης YCH. Επομένως, υπήρχαν ενδεχομένως ορισμένες ποιοτικές διαφορές μεταξύ τους. Ταυτόχρονα, τα πρόσφατα ανακαλυφθέντα πιθανά δραστικά συστατικά της YCH θα μπορούσαν να έχουν σημαντική τιμή αναφοράς για τη μελέτη της λειτουργικής βάσης της YCH και την περαιτέρω ανάπτυξη των πόρων της YCH.
Η σημασία των γνήσιων φαρμακευτικών υλικών έχει αναγνωριστεί εδώ και καιρό στην συγκεκριμένη περιοχή προέλευσης για την παραγωγή κινεζικών φυτικών φαρμάκων εξαιρετικής ποιότητας [8]. Η υψηλή ποιότητα είναι ένα βασικό χαρακτηριστικό των γνήσιων φαρμακευτικών υλικών και το περιβάλλον είναι ένας σημαντικός παράγοντας που επηρεάζει την ποιότητα αυτών των υλικών. Από τότε που το YCH άρχισε να χρησιμοποιείται ως φάρμακο, εδώ και καιρό κυριαρχείται από το άγριο YCH. Μετά την επιτυχημένη εισαγωγή και εξημέρωση του YCH στη Νινγκσία τη δεκαετία του 1980, η πηγή των φαρμακευτικών υλικών Yinchaihu σταδιακά μετατοπίστηκε από το άγριο στο καλλιεργημένο YCH. Σύμφωνα με προηγούμενη έρευνα για τις πηγές YCH [9] και την έρευνα πεδίου της ερευνητικής μας ομάδας, υπάρχουν σημαντικές διαφορές στις περιοχές κατανομής των καλλιεργούμενων και άγριων φαρμακευτικών υλικών. Το άγριο YCH κατανέμεται κυρίως στην Αυτόνομη Περιφέρεια Ningxia Hui της επαρχίας Shaanxi, δίπλα στην άνυδρη ζώνη της Εσωτερικής Μογγολίας και την κεντρική Ningxia. Συγκεκριμένα, η στέπα της ερήμου σε αυτές τις περιοχές είναι το καταλληλότερο βιότοπο για την ανάπτυξη του YCH. Αντίθετα, το καλλιεργημένο YCH κατανέμεται κυρίως στα νότια της περιοχής κατανομής του άγριου, όπως η κομητεία Tongxin (Cultivated I) και οι γύρω περιοχές, η οποία έχει γίνει η μεγαλύτερη βάση καλλιέργειας και παραγωγής στην Κίνα, και η κομητεία Pengyang (Cultivated II), η οποία βρίσκεται σε μια πιο νότια περιοχή και είναι μια άλλη περιοχή παραγωγής για καλλιεργημένο YCH. Επιπλέον, τα βιότοπα των δύο παραπάνω καλλιεργούμενων περιοχών δεν είναι στέπα της ερήμου. Επομένως, εκτός από τον τρόπο παραγωγής, υπάρχουν επίσης σημαντικές διαφορές στο βιότοπο του άγριου και του καλλιεργημένου YCH. Το βιότοπο είναι ένας σημαντικός παράγοντας που επηρεάζει την ποιότητα των φυτικών φαρμακευτικών υλικών. Τα διαφορετικά βιότοπα θα επηρεάσουν τον σχηματισμό και τη συσσώρευση δευτερογενών μεταβολιτών στα φυτά, επηρεάζοντας έτσι την ποιότητα των φαρμακευτικών προϊόντων [10,11]. Επομένως, οι σημαντικές διαφορές στην περιεκτικότητα των συνολικών φλαβονοειδών και των συνολικών στερολών και στην έκφραση των 53 μεταβολιτών που βρήκαμε σε αυτή τη μελέτη μπορεί να είναι αποτέλεσμα διαφορών στη διαχείριση του πεδίου και στα ενδιαιτήματα.Ένας από τους κύριους τρόπους με τους οποίους το περιβάλλον επηρεάζει την ποιότητα των φαρμακευτικών υλικών είναι η άσκηση πίεσης στα φυτά προέλευσης. Η μέτρια περιβαλλοντική πίεση τείνει να διεγείρει τη συσσώρευση δευτερογενών μεταβολιτών [12,13]. Η υπόθεση ισορροπίας ανάπτυξης/διαφοροποίησης δηλώνει ότι, όταν τα θρεπτικά συστατικά είναι σε επαρκή ποσότητα, τα φυτά αναπτύσσονται κυρίως, ενώ όταν τα θρεπτικά συστατικά είναι ελλιπή, τα φυτά διαφοροποιούνται κυρίως και παράγουν περισσότερους δευτερογενείς μεταβολίτες [14]. Το στρες από την ξηρασία που προκαλείται από την έλλειψη νερού είναι το κύριο περιβαλλοντικό στρες που αντιμετωπίζουν τα φυτά σε άνυδρες περιοχές. Σε αυτή τη μελέτη, η κατάσταση του νερού του καλλιεργημένου YCH είναι πιο άφθονη, με ετήσια επίπεδα βροχόπτωσης σημαντικά υψηλότερα από αυτά του άγριου YCH (η παροχή νερού για το Cultivated I ήταν περίπου 2 φορές μεγαλύτερη από αυτή του Wild· το Cultivated II ήταν περίπου 3,5 φορές μεγαλύτερη από αυτή του Wild). Επιπλέον, το έδαφος στο άγριο περιβάλλον είναι αμμώδες, αλλά το έδαφος στις γεωργικές εκτάσεις είναι αργιλώδες. Σε σύγκριση με το αργιλώδες, το αμμώδες έδαφος έχει κακή ικανότητα συγκράτησης νερού και είναι πιο πιθανό να επιδεινώσει το στρες από την ξηρασία. Ταυτόχρονα, η διαδικασία καλλιέργειας συχνά συνοδευόταν από πότισμα, επομένως ο βαθμός στρες από την ξηρασία ήταν χαμηλός. Το άγριο YCH αναπτύσσεται σε σκληρά φυσικά άνυδρα ενδιαιτήματα και επομένως μπορεί να υποστεί πιο σοβαρό στρες από την ξηρασία.Η ωσμωτική ρύθμιση είναι ένας σημαντικός φυσιολογικός μηχανισμός με τον οποίο τα φυτά αντιμετωπίζουν το στρες της ξηρασίας και τα αλκαλοειδή είναι σημαντικοί ωσμωτικοί ρυθμιστές στα ανώτερα φυτά [15]. Οι βεταΐνες είναι υδατοδιαλυτές αλκαλοειδείς ενώσεις τεταρτοταγούς αμμωνίου και μπορούν να δράσουν ως ωσμωτικά. Το στρες από την ξηρασία μπορεί να μειώσει το ωσμωτικό δυναμικό των κυττάρων, ενώ τα ωσμωτικά διατηρούν και διατηρούν τη δομή και την ακεραιότητα των βιολογικών μακρομορίων και μετριάζουν αποτελεσματικά τη ζημιά που προκαλείται από το στρες από την ξηρασία στα φυτά [16]. Για παράδειγμα, υπό συνθήκες ξηρασίας, η περιεκτικότητα σε βεταΐνη των ζαχαρότευτλων και του Lycium barbarum αυξήθηκε σημαντικά [17,18]. Η τριγονελλίνη είναι ρυθμιστής της κυτταρικής ανάπτυξης και, υπό συνθήκες ξηρασίας, μπορεί να παρατείνει τη διάρκεια του κυτταρικού κύκλου του φυτού, να αναστείλει την κυτταρική ανάπτυξη και να οδηγήσει σε συρρίκνωση του κυτταρικού όγκου. Η σχετική αύξηση της συγκέντρωσης διαλυμένης ουσίας στο κύτταρο επιτρέπει στο φυτό να επιτύχει οσμωτική ρύθμιση και να ενισχύσει την ικανότητά του να αντιστέκεται στο στρες ξηρασίας [19]. JIA X [20] διαπίστωσαν ότι, με την αύξηση του στρες από την ξηρασία, το Astragalus membranaceus (πηγή της παραδοσιακής κινεζικής ιατρικής) παρήγαγε περισσότερη τριγονελίνη, η οποία δρα ρυθμίζοντας το οσμωτικό δυναμικό και βελτιώνοντας την ικανότητα αντοχής στο στρες από την ξηρασία. Τα φλαβονοειδή έχουν επίσης αποδειχθεί ότι παίζουν σημαντικό ρόλο στην αντοχή των φυτών στο στρες από την ξηρασία [21,22]. Ένας μεγάλος αριθμός μελετών έχει επιβεβαιώσει ότι η μέτρια ξηρασία ευνοούσε τη συσσώρευση φλαβονοειδών. Lang Duo-Yong et al. [23] συνέκριναν τις επιπτώσεις του στρες από την ξηρασία στο YCH ελέγχοντας την ικανότητα συγκράτησης νερού στο χωράφι. Διαπιστώθηκε ότι το στρες από την ξηρασία ανέστειλε την ανάπτυξη των ριζών σε κάποιο βαθμό, αλλά σε μέτρια και σοβαρή ξηρασία (40% της ικανότητας συγκράτησης νερού στο χωράφι), η συνολική περιεκτικότητα σε φλαβονοειδή στο YCH αυξήθηκε. Εν τω μεταξύ, υπό στρες από ξηρασία, οι φυτοστερόλες μπορούν να δράσουν ρυθμίζοντας τη ρευστότητα και τη διαπερατότητα της κυτταρικής μεμβράνης, αναστέλλοντας την απώλεια νερού και βελτιώνοντας την αντοχή στο στρες [24,25]. Επομένως, η αυξημένη συσσώρευση συνολικών φλαβονοειδών, συνολικών στερολών, βεταΐνης, τριγονελλίνης και άλλων δευτερογενών μεταβολιτών στην άγρια YCH μπορεί να σχετίζεται με το στρες ξηρασίας υψηλής έντασης.Σε αυτή τη μελέτη, πραγματοποιήθηκε ανάλυση εμπλουτισμού της οδού KEGG στους μεταβολίτες που βρέθηκαν να διαφέρουν σημαντικά μεταξύ του άγριου και του καλλιεργημένου YCH. Οι εμπλουτισμένοι μεταβολίτες περιελάμβαναν εκείνους που εμπλέκονται στις οδούς μεταβολισμού του ασκορβικού και του αλδαρατικού, της βιοσύνθεσης του αμινοακυλ-tRNA, του μεταβολισμού της ιστιδίνης και του μεταβολισμού της βήτα-αλανίνης. Αυτές οι μεταβολικές οδοί σχετίζονται στενά με τους μηχανισμούς αντοχής στο στρες των φυτών. Μεταξύ αυτών, ο μεταβολισμός του ασκορβικού παίζει σημαντικό ρόλο στην παραγωγή αντιοξειδωτικών των φυτών, στον μεταβολισμό του άνθρακα και του αζώτου, στην αντοχή στο στρες και σε άλλες φυσιολογικές λειτουργίες [26]; Η βιοσύνθεση του αμινοακυλ-tRNA είναι μια σημαντική οδός για τον σχηματισμό πρωτεϊνών [27,28], η οποία εμπλέκεται στη σύνθεση πρωτεϊνών ανθεκτικών στο στρες. Τόσο η ιστιδίνη όσο και η β-αλανίνη μπορούν να ενισχύσουν την ανοχή των φυτών στο περιβαλλοντικό στρες [29,30]. Αυτό δείχνει περαιτέρω ότι οι διαφορές στους μεταβολίτες μεταξύ της άγριας και της καλλιεργημένης YCH σχετίζονταν στενά με τις διαδικασίες αντοχής στο στρες.Το έδαφος αποτελεί την υλική βάση για την ανάπτυξη και την ανάπτυξη των φαρμακευτικών φυτών. Το άζωτο (N), ο φώσφορος (P) και το κάλιο (K) στο έδαφος είναι σημαντικά θρεπτικά στοιχεία για την ανάπτυξη και την ανάπτυξη των φυτών. Η οργανική ύλη του εδάφους περιέχει επίσης N, P, K, Zn, Ca, Mg και άλλα μακροστοιχεία και ιχνοστοιχεία που απαιτούνται για τα φαρμακευτικά φυτά. Η υπερβολική ή η ανεπαρκής αναλογία θρεπτικών συστατικών ή οι μη ισορροπημένες αναλογίες θρεπτικών συστατικών θα επηρεάσουν την ανάπτυξη και την ποιότητα των φαρμακευτικών υλικών, και τα διαφορετικά φυτά έχουν διαφορετικές απαιτήσεις σε θρεπτικά συστατικά [31,32,33]. Για παράδειγμα, ένα χαμηλό στρες Ν προώθησε τη σύνθεση αλκαλοειδών στο Isatis indigotica και ήταν ευεργετικό για τη συσσώρευση φλαβονοειδών σε φυτά όπως το Tetrastigma hemsleyanum, το Crataegus pinnatifida Bunge και το Dichondra repens Forst. Αντίθετα, η υπερβολική ποσότητα Ν ανέστειλε τη συσσώρευση φλαβονοειδών σε είδη όπως το Erigeron breviscapus, το Abrus cantoniensis και το Ginkgo biloba και επηρέασε την ποιότητα των φαρμακευτικών υλικών [34]. Η εφαρμογή φωσφορικού λιπάσματος ήταν αποτελεσματική στην αύξηση της περιεκτικότητας σε γλυκυρριζικό οξύ και διυδροακετόνη στην γλυκόριζα Ουραλίου [35]. Όταν η ποσότητα εφαρμογής ξεπέρασε τα 0,12 kg·m−2, η συνολική περιεκτικότητα σε φλαβονοειδή στο Tussilago farfara μειώθηκε [36]. Η εφαρμογή ενός λιπάσματος φωσφόρου είχε αρνητική επίδραση στην περιεκτικότητα σε πολυσακχαρίτες στο παραδοσιακό κινέζικο φάρμακο rhizoma polygonati [37], αλλά ένα λίπασμα Κ ήταν αποτελεσματικό στην αύξηση της περιεκτικότητάς του σε σαπωνίνες [38]. Η εφαρμογή λιπάσματος 450 kg·hm−2 K ήταν η καλύτερη για την ανάπτυξη και τη συσσώρευση σαπωνινών του διετούς Panax notoginseng [39]. Υπό την αναλογία N:P:K = 2:2:1, οι συνολικές ποσότητες υδροθερμικού εκχυλίσματος, αρπαγίδης και αρπαγοσίδης ήταν οι υψηλότερες [40]. Η υψηλή αναλογία N, P και K ήταν ευεργετική για την προώθηση της ανάπτυξης του Pogostemon cablin και την αύξηση της περιεκτικότητας σε πτητικό έλαιο. Μια χαμηλή αναλογία N, P και K αύξησε την περιεκτικότητα των κύριων αποτελεσματικών συστατικών του ελαίου των φύλλων του βλαστού του Pogostemon cablin [41]. Το YCH είναι ένα φυτό ανθεκτικό σε άγονο έδαφος και μπορεί να έχει συγκεκριμένες απαιτήσεις σε θρεπτικά συστατικά όπως N, P και K. Σε αυτή τη μελέτη, σε σύγκριση με το καλλιεργημένο YCH, το έδαφος των άγριων φυτών YCH ήταν σχετικά άγονο: η περιεκτικότητα του εδάφους σε οργανική ύλη, το συνολικό N, το συνολικό P και το συνολικό K ήταν περίπου 1/10, 1/2, 1/3 και 1/3 από εκείνη των καλλιεργούμενων φυτών, αντίστοιχα. Επομένως, οι διαφορές στα θρεπτικά συστατικά του εδάφους μπορεί να είναι ένας άλλος λόγος για τις διαφορές μεταξύ των μεταβολιτών που ανιχνεύθηκαν στο καλλιεργημένο και το άγριο YCH. Weibao Ma et al. [42] διαπίστωσαν ότι η εφαρμογή μιας ορισμένης ποσότητας λιπάσματος αζώτου και λιπάσματος φωσφόρου βελτίωσε σημαντικά την απόδοση και την ποιότητα των σπόρων. Ωστόσο, η επίδραση των θρεπτικών στοιχείων στην ποιότητα του YCH δεν είναι σαφής και τα μέτρα λίπανσης για τη βελτίωση της ποιότητας των φαρμακευτικών υλικών χρειάζονται περαιτέρω μελέτη.Τα κινεζικά φυτικά φάρμακα έχουν τα χαρακτηριστικά «τα ευνοϊκά ενδιαιτήματα προάγουν την απόδοση και τα δυσμενή ενδιαιτήματα βελτιώνουν την ποιότητα» [43]. Κατά τη διαδικασία της σταδιακής μετάβασης από την άγρια στην καλλιεργούμενη YCH, το βιότοπο των φυτών άλλαξε από την άνυδρη και άγονη στέπα της ερήμου σε εύφορη γεωργική γη με πιο άφθονο νερό. Το βιότοπο της καλλιεργούμενης YCH είναι ανώτερο και η απόδοση υψηλότερη, γεγονός που βοηθά στην κάλυψη της ζήτησης της αγοράς. Ωστόσο, αυτό το ανώτερο βιότοπο οδήγησε σε σημαντικές αλλαγές στους μεταβολίτες της YCH. Το κατά πόσον αυτό συμβάλλει στη βελτίωση της ποιότητας της YCH και πώς μπορεί να επιτευχθεί υψηλής ποιότητας παραγωγή YCH μέσω επιστημονικά τεκμηριωμένων καλλιεργητικών μέτρων θα απαιτήσει περαιτέρω έρευνα.Η προσομοιωτική καλλιέργεια οικοτόπων είναι μια μέθοδος προσομοίωσης των συνθηκών οικοτόπου και περιβάλλοντος των άγριων φαρμακευτικών φυτών, βασισμένη στη γνώση της μακροπρόθεσμης προσαρμογής των φυτών σε συγκεκριμένες περιβαλλοντικές πιέσεις [43]. Προσομοιώνοντας διάφορους περιβαλλοντικούς παράγοντες που επηρεάζουν τα άγρια φυτά, ειδικά το αρχικό βιότοπο των φυτών που χρησιμοποιούνται ως πηγές αυθεντικών φαρμακευτικών υλικών, η προσέγγιση χρησιμοποιεί επιστημονικό σχεδιασμό και καινοτόμο ανθρώπινη παρέμβαση για να εξισορροπήσει την ανάπτυξη και τον δευτερογενή μεταβολισμό των κινεζικών φαρμακευτικών φυτών [43]. Η μέθοδος στοχεύει στην επίτευξη των βέλτιστων ρυθμίσεων για την ανάπτυξη φαρμακευτικών υλικών υψηλής ποιότητας. Η προσομοιωτική καλλιέργεια σε ενδιαιτήματα θα πρέπει να παρέχει έναν αποτελεσματικό τρόπο για την παραγωγή υψηλής ποιότητας YCH, ακόμη και όταν η φαρμακοδυναμική βάση, οι δείκτες ποιότητας και οι μηχανισμοί απόκρισης σε περιβαλλοντικούς παράγοντες είναι ασαφείς. Συνεπώς, προτείνουμε ότι ο επιστημονικός σχεδιασμός και τα μέτρα διαχείρισης πεδίου στην καλλιέργεια και την παραγωγή YCH θα πρέπει να διεξάγονται με αναφορά στα περιβαλλοντικά χαρακτηριστικά της άγριας YCH, όπως οι άνυδρες, άγονες και αμμώδεις εδαφικές συνθήκες. Ταυτόχρονα, ελπίζεται επίσης ότι οι ερευνητές θα διεξάγουν πιο εις βάθος έρευνα σχετικά με τη λειτουργική βάση των υλικών και τους δείκτες ποιότητας της YCH. Αυτές οι μελέτες μπορούν να παρέχουν πιο αποτελεσματικά κριτήρια αξιολόγησης για την YCH και να προωθήσουν την παραγωγή υψηλής ποιότητας και τη βιώσιμη ανάπτυξη του κλάδου. -
Φυτικό έλαιο Fructus Amomi Φυσικοί διαχυτές μασάζ 1kg Αιθέριο έλαιο Amomum villosum
Η οικογένεια Zingiberaceae έχει προσελκύσει αυξανόμενη προσοχή στην αλληλοπαθητική έρευνα λόγω των πλούσιων πτητικών ελαίων και της αρωματικότητας των ειδών-μελών της. Προηγούμενη έρευνα είχε δείξει ότι οι χημικές ουσίες από το Curcuma zedoaria (ζεδοαρύ) [40], Alpinia zerumbet (Ατομικά) BLBurtt & RMSm. [41] και Zingiber officinale Rosc. [42] της οικογένειας τζίντζερ έχουν αλλελοπαθητικές επιδράσεις στη βλάστηση των σπόρων και στην ανάπτυξη των σπορόφυτων του καλαμποκιού, του μαρουλιού και της ντομάτας. Η τρέχουσα μελέτη μας είναι η πρώτη αναφορά στην αλλελοπαθητική δράση των πτητικών ουσιών από τους μίσχους, τα φύλλα και τους νεαρούς καρπούς του A. villosum (μέλος της οικογένειας Zingiberaceae). Η απόδοση σε λάδι των μίσχων, των φύλλων και των νεαρών καρπών ήταν 0,15%, 0,40% και 0,50% αντίστοιχα, υποδεικνύοντας ότι οι καρποί παρήγαγαν μεγαλύτερη ποσότητα πτητικών ελαίων από τους μίσχους και τα φύλλα. Τα κύρια συστατικά των πτητικών ελαίων από τους μίσχους ήταν το β-πινένιο, το β-φελανδρένιο και το α-πινένιο, κάτι που ήταν παρόμοιο με αυτό των κύριων χημικών ουσιών του φυλλικού ελαίου, β-πινένιο και α-πινένιο (μονοτερπενικοί υδρογονάνθρακες). Από την άλλη πλευρά, το έλαιο στους νεαρούς καρπούς ήταν πλούσιο σε οξικό βορνύλιο και καμφορά (οξυγονωμένα μονοτερπένια). Τα αποτελέσματα υποστηρίχθηκαν από τα ευρήματα του Do N Dai [30,32] και Χούι Άο [31] οι οποίοι είχαν εντοπίσει τα έλαια από διαφορετικά όργανα του A. villosum.
Έχουν υπάρξει αρκετές αναφορές σχετικά με την ανασταλτική δράση αυτών των κύριων ενώσεων στην ανάπτυξη των φυτών σε άλλα είδη. Ο Shalinder Kaur διαπίστωσε ότι το α-πινένιο από τον ευκάλυπτο κατέστειλε εμφανώς το μήκος της ρίζας και το ύψος των βλαστών του Amaranthus viridis L. σε συγκέντρωση 1,0 μL [43], και μια άλλη μελέτη έδειξε ότι το α-πινένιο ανέστειλε την πρώιμη ανάπτυξη των ριζών και προκάλεσε οξειδωτική βλάβη στον ριζικό ιστό μέσω της αυξημένης παραγωγής δραστικών ειδών οξυγόνου [44]. Ορισμένες αναφορές έχουν υποστηρίξει ότι το β-πινένιο ανέστειλε τη βλάστηση και την ανάπτυξη των σπορόφυτων των δοκιμαστικών ζιζανίων με τρόπο δοσοεξαρτώμενο, διαταράσσοντας την ακεραιότητα της μεμβράνης [45], αλλάζοντας τη βιοχημεία των φυτών και ενισχύοντας τις δραστηριότητες των υπεροξειδασών και των πολυφαινολοξειδασών [46]. Το β-φελανδρένιο επέδειξε μέγιστη αναστολή στη βλάστηση και την ανάπτυξη του Vigna unguiculata (L.) Walp σε συγκέντρωση 600 ppm [47], ενώ, σε συγκέντρωση 250 mg/m3, η καμφορά κατέστειλε την ανάπτυξη των ριζών και των βλαστών του Lepidium sativum L. [48]. Ωστόσο, η έρευνα που αναφέρει την αλλελοπαθητική επίδραση του οξικού βορνυλίου είναι περιορισμένη. Στη μελέτη μας, οι αλλελοπαθητικές επιδράσεις του β-πινενίου, του οξικού βορνυλίου και της καμφοράς στο μήκος της ρίζας ήταν ασθενέστερες από ό,τι για τα πτητικά έλαια εκτός από το α-πινένιο, ενώ το έλαιο των φύλλων, πλούσιο σε α-πινένιο, ήταν επίσης πιο φυτοτοξικό από τα αντίστοιχα πτητικά έλαια από τους μίσχους και τους καρπούς του A. villosum, και τα δύο ευρήματα υποδεικνύουν ότι το α-πινένιο μπορεί να είναι η σημαντική χημική ουσία για την αλλελοπάθεια σε αυτό το είδος. Ταυτόχρονα, τα αποτελέσματα υποδηλώνουν επίσης ότι ορισμένες ενώσεις στο έλαιο των καρπών που δεν ήταν άφθονες μπορεί να συμβάλλουν στην παραγωγή του φυτοτοξικού αποτελέσματος, ένα εύρημα που χρειάζεται περαιτέρω έρευνα στο μέλλον.Υπό κανονικές συνθήκες, η αλλελοπαθητική επίδραση των αλλοχημικών είναι ειδική για κάθε είδος. Ο Jiang et al. διαπίστωσε ότι το αιθέριο έλαιο που παράγεται από την Artemisia sieversiana άσκησε ισχυρότερη επίδραση στο Amaranthus retroflexus L. από ό,τι στο Medicago sativa L., το Poa annua L. και το Pennisetum alopecuroides (L.) Spreng. [49]. Σε μια άλλη μελέτη, το πτητικό έλαιο του Lavandula angustifolia Mill. προκάλεσε διαφορετικούς βαθμούς φυτοτοξικών επιδράσεων σε διαφορετικά είδη φυτών. Το Lolium multiflorum Lam. ήταν το πιο ευαίσθητο είδος δέκτη, με την ανάπτυξη υποκοτυλίου και ριζιδίου να αναστέλλεται κατά 87,8% και 76,7%, αντίστοιχα, σε δόση 1 μL/mL ελαίων, αλλά η ανάπτυξη υποκοτυλίου των σπορόφυτων αγγουριού επηρεάστηκε ελάχιστα [20]. Τα αποτελέσματά μας έδειξαν επίσης ότι υπήρχε διαφορά στην ευαισθησία στις πτητικές ουσίες του A. villosum μεταξύ του L. sativa και του L. perenne.Οι πτητικές ενώσεις και τα αιθέρια έλαια του ίδιου είδους μπορούν να ποικίλλουν ποσοτικά ή/και ποιοτικά λόγω των συνθηκών ανάπτυξης, των μερών του φυτού και των μεθόδων ανίχνευσης. Για παράδειγμα, μια αναφορά έδειξε ότι το πυρανοειδές (10,3%) και το β-καρυοφυλλένιο (6,6%) ήταν οι κύριες ενώσεις των πτητικών που εκπέμπονταν από τα φύλλα του Sambucus nigra, ενώ η βενζαλδεΰδη (17,8%), το α-βουλνεσένιο (16,6%) και το τετρακοζάνιο (11,5%) ήταν άφθονα στα έλαια που εξάγονταν από τα φύλλα [50]. Στη μελέτη μας, οι πτητικές ενώσεις που απελευθερώθηκαν από τα φρέσκα φυτικά υλικά είχαν ισχυρότερες αλλελοπαθητικές επιδράσεις στα φυτά δοκιμής από ό,τι τα εκχυλισμένα πτητικά έλαια, με τις διαφορές στην απόκριση να σχετίζονται στενά με τις διαφορές στις αλλελοχημικές ουσίες που υπάρχουν στα δύο παρασκευάσματα. Οι ακριβείς διαφορές μεταξύ των πτητικών ενώσεων και των ελαίων πρέπει να διερευνηθούν περαιτέρω σε επόμενα πειράματα.Οι διαφορές στην μικροβιακή ποικιλομορφία και τη δομή της μικροβιακής κοινότητας σε δείγματα εδάφους στα οποία είχαν προστεθεί πτητικά έλαια σχετίζονταν με τον ανταγωνισμό μεταξύ των μικροοργανισμών καθώς και με τυχόν τοξικές επιδράσεις και τη διάρκεια των πτητικών ελαίων στο έδαφος. Βώκου και Λιοτίρη [51] διαπίστωσαν ότι η αντίστοιχη εφαρμογή τεσσάρων αιθέριων ελαίων (0,1 mL) σε καλλιεργημένο έδαφος (150 g) ενεργοποίησε την αναπνοή των δειγμάτων εδάφους, ακόμη και τα έλαια διέφεραν ως προς τη χημική τους σύνθεση, γεγονός που υποδηλώνει ότι τα φυτικά έλαια χρησιμοποιούνται ως πηγή άνθρακα και ενέργειας από τους μικροοργανισμούς του εδάφους. Τα δεδομένα που ελήφθησαν από την παρούσα μελέτη επιβεβαίωσαν ότι τα έλαια από ολόκληρο το φυτό A. villosum συνέβαλαν στην προφανή αύξηση του αριθμού των ειδών μυκήτων του εδάφους μέχρι την 14η ημέρα μετά την προσθήκη ελαίου, υποδεικνύοντας ότι το έλαιο μπορεί να παρέχει την πηγή άνθρακα για περισσότερους μύκητες του εδάφους. Μια άλλη μελέτη ανέφερε ένα εύρημα: οι μικροοργανισμοί του εδάφους ανέκτησαν την αρχική τους λειτουργία και βιομάζα μετά από μια προσωρινή περίοδο μεταβολής που προκλήθηκε από την προσθήκη ελαίου Thymbra capitata L. (Cav), αλλά το έλαιο στην υψηλότερη δόση (0,93 μL ελαίου ανά γραμμάριο εδάφους) δεν επέτρεψε στους μικροοργανισμούς του εδάφους να ανακτήσουν την αρχική τους λειτουργικότητα [52]. Στην παρούσα μελέτη, με βάση τη μικροβιολογική ανάλυση του εδάφους μετά από επεξεργασία με διαφορετικές ημέρες και συγκεντρώσεις, υποθέσαμε ότι η βακτηριακή κοινότητα του εδάφους θα ανακάμψει μετά από περισσότερες ημέρες. Αντίθετα, η μυκητιακή μικροχλωρίδα δεν μπορεί να επιστρέψει στην αρχική της κατάσταση. Τα ακόλουθα αποτελέσματα επιβεβαιώνουν αυτήν την υπόθεση: η ξεχωριστή επίδραση της υψηλής συγκέντρωσης του ελαίου στη σύνθεση του μυκητιακού μικροβιώματος του εδάφους αποκαλύφθηκε με ανάλυση κύριων συντεταγμένων (PCoA), και οι παρουσιάσεις του θερμικού χάρτη επιβεβαίωσαν για άλλη μια φορά ότι η σύνθεση της μυκητιακής κοινότητας του εδάφους που υποβλήθηκε σε επεξεργασία με 3,0 mg/mL έλαιο (δηλαδή 0,375 mg έλαιο ανά γραμμάριο εδάφους) σε επίπεδο γένους διέφερε σημαντικά από τις άλλες επεξεργασίες. Προς το παρόν, η έρευνα σχετικά με τις επιπτώσεις της προσθήκης μονοτερπενικών υδρογονανθράκων ή οξυγονωμένων μονοτερπενίων στην μικροβιακή ποικιλομορφία του εδάφους και τη δομή της κοινότητας είναι ακόμη περιορισμένη. Μερικές μελέτες ανέφεραν ότι το α-πινένιο αύξησε τη μικροβιακή δραστηριότητα του εδάφους και τη σχετική αφθονία των Methylophilaceae (μια ομάδα μεθυλότροφων, Proteobacteria) υπό χαμηλή περιεκτικότητα σε υγρασία, παίζοντας σημαντικό ρόλο ως πηγή άνθρακα σε ξηρότερα εδάφη [53]. Ομοίως, πτητικό έλαιο ολόκληρου του φυτού A. villosum, που περιέχει 15,03% α-πινένιο (Συμπληρωματικός Πίνακας S1), αύξησε προφανώς τη σχετική αφθονία των Πρωτεοβακτηρίων στα 1,5 mg/mL και 3,0 mg/mL, γεγονός που υποδηλώνει ότι το α-πινένιο πιθανώς δρα ως μία από τις πηγές άνθρακα για τους μικροοργανισμούς του εδάφους.Οι πτητικές ενώσεις που παράγονται από διαφορετικά όργανα του A. villosum είχαν διάφορους βαθμούς αλλελοπαθητικών επιδράσεων στο L. sativa και το L. perenne, κάτι που σχετιζόταν στενά με τα χημικά συστατικά που περιείχαν τα μέρη του φυτού A. villosum. Αν και η χημική σύνθεση του πτητικού ελαίου επιβεβαιώθηκε, οι πτητικές ενώσεις που απελευθερώνονται από το A. villosum σε θερμοκρασία δωματίου είναι άγνωστες, κάτι που χρήζει περαιτέρω διερεύνησης. Επιπλέον, η συνεργιστική επίδραση μεταξύ διαφορετικών αλλοχημικών ουσιών είναι επίσης άξια εξέτασης. Όσον αφορά τους μικροοργανισμούς του εδάφους, για να διερευνήσουμε διεξοδικά την επίδραση του πτητικού ελαίου στους μικροοργανισμούς του εδάφους, πρέπει ακόμη να διεξάγουμε πιο εις βάθος έρευνα: να παρατείνουμε τον χρόνο επεξεργασίας του πτητικού ελαίου και να διακρίνουμε τις διακυμάνσεις στη χημική σύνθεση του πτητικού ελαίου στο έδαφος σε διαφορετικές ημέρες. -
Καθαρό λάδι Artemisia capillaris για κεριά και σαπωνοποιία χονδρικής αιθέριο έλαιο διαχύτη νέο για διαχύτες καυστήρων καλαμιών
Σχεδιασμός μοντέλου τρωκτικού
Τα ζώα χωρίστηκαν τυχαία σε πέντε ομάδες των δεκαπέντε ποντικών η καθεμία. Τα ποντίκια της ομάδας ελέγχου και της ομάδας μοντέλου έλαβαν στομαχικό σωλήνα μεσησαμέλαιογια 6 ημέρες. Τα ποντίκια της ομάδας θετικού ελέγχου έλαβαν δισκία bifendate (BT, 10 mg/kg) για 6 ημέρες. Οι πειραματικές ομάδες έλαβαν θεραπεία με 100 mg/kg και 50 mg/kg AEO διαλυμένα σε σησαμέλαιο για 6 ημέρες. Την 6η ημέρα, η ομάδα ελέγχου έλαβε σησαμέλαιο και όλες οι άλλες ομάδες έλαβαν μία εφάπαξ δόση 0,2% CCl4 σε σησαμέλαιο (10 ml/kg) μεενδοπεριτοναϊκή ένεσηΣτη συνέχεια, τα ποντίκια τέθηκαν σε νηστεία χωρίς νερό και ελήφθησαν δείγματα αίματος από τα οπισθοβολβικά αγγεία. Το συλλεγμένο αίμα φυγοκεντρήθηκε στις 3000 ×gγια 10 λεπτά για να διαχωριστεί ο ορός.Εξάρθρωση τραχήλουπραγματοποιήθηκε αμέσως μετά τη λήψη αίματος και τα δείγματα ήπατος αφαιρέθηκαν αμέσως. Ένα μέρος του δείγματος ήπατος αποθηκεύτηκε αμέσως στους -20 °C μέχρι την ανάλυση και ένα άλλο μέρος αφαιρέθηκε και σταθεροποιήθηκε σε δοχείο 10%.φορμαλίνηδιάλυμα· οι υπόλοιποι ιστοί αποθηκεύτηκαν στους -80 °C για ιστοπαθολογική ανάλυση (Wang κ.ά., 2008,Χσου κ.ά., 2009,Νιε κ.ά., 2015).
Μέτρηση των βιοχημικών παραμέτρων στον ορό
Η ηπατική βλάβη αξιολογήθηκε εκτιμώντας τηνενζυμικές δραστηριότητεςτης ALT και της AST ορού χρησιμοποιώντας τα αντίστοιχα εμπορικά κιτ σύμφωνα με τις οδηγίες για τα κιτ (Nanjing, επαρχία Jiangsu, Κίνα). Οι ενζυμικές δραστικότητες εκφράστηκαν σε μονάδες ανά λίτρο (U/l).
Μέτρηση MDA, SOD, GSH και GSH-Pxσε ομογενοποιήματα ήπατος
Οι ιστοί του ήπατος ομογενοποιήθηκαν με κρύο φυσιολογικό ορό σε αναλογία 1:9 (w/v, ήπαρ:φυσιολογικό ορό). Τα ομογενοποιήματα φυγοκεντρήθηκαν (2500 ×gγια 10 λεπτά) για τη συλλογή των υπερκείμενων υγρών για τους επόμενους προσδιορισμούς. Η ηπατική βλάβη αξιολογήθηκε σύμφωνα με τις ηπατικές μετρήσεις των επιπέδων MDA και GSH, καθώς και τις τιμές SOD και GSH-P.xΌλες αυτές οι δραστικότητες προσδιορίστηκαν σύμφωνα με τις οδηγίες στο κιτ (Nanjing, επαρχία Jiangsu, Κίνα). Τα αποτελέσματα για την MDA και την GSH εκφράστηκαν ως nmol ανά mg πρωτεΐνης (nmol/mg πρωτεΐνης), και οι δραστικότητες της SOD και της GSH-Pxεκφράστηκαν ως U ανά mg πρωτεΐνης (U/mg πρωτεΐνης).
Ιστοπαθολογική ανάλυση
Τμήματα του φρεσκοληφθέντος ήπατος σταθεροποιήθηκαν σε ρυθμιστικό διάλυμα 10%.παραφορμαλδεΰδηδιάλυμα φωσφορικών. Το δείγμα στη συνέχεια ενσωματώθηκε σε παραφίνη, τεμαχίστηκε σε τομές 3-5 μm, χρωματίστηκε μεαιματοξυλίνηκαιηωσίνη(Υ&Ε) σύμφωνα με μια τυποποιημένη διαδικασία και τελικά αναλύθηκε απόφωτεινή μικροσκοπία(Τιάν κ.ά., 2012).
Στατιστική ανάλυση
Τα αποτελέσματα εκφράστηκαν ως ο μέσος όρος ± τυπική απόκλιση (SD). Τα αποτελέσματα αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας το στατιστικό πρόγραμμα SPSS Statistics, έκδοση 19.0. Τα δεδομένα υποβλήθηκαν σε ανάλυση διακύμανσης (ANOVA,p< 0,05) ακολουθούμενη από το τεστ Dunnett και το τεστ Dunnett T3 για τον προσδιορισμό των στατιστικά σημαντικών διαφορών μεταξύ των τιμών διαφόρων πειραματικών ομάδων. Μια σημαντική διαφορά λήφθηκε υπόψη σε επίπεδοp< 0,05.
Αποτελέσματα και συζήτηση
Συστατικά στοιχεία του AEO
Μετά από ανάλυση GC/MS, διαπιστώθηκε ότι το AEO περιείχε 25 συστατικά που εκλούστηκαν από 10 έως 35 λεπτά και ταυτοποιήθηκαν 21 συστατικά που αντιπροσωπεύουν το 84% του αιθέριου ελαίου.Πίνακας 1). Το πτητικό έλαιο που περιείχεμονοτερπενοειδή(80,9%), σεσκιτερπενοειδή (9,5%), κορεσμένοι μη διακλαδισμένοι υδρογονάνθρακες (4,86%) και διάφορα ακετυλένια (4,86%). Σε σύγκριση με άλλες μελέτες (Γκούο κ.ά., 2004), βρήκαμε άφθονα μονοτερπενοειδή (80,90%) στο AEO. Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι το πιο άφθονο συστατικό του AEO είναι η β-κιτρονελλόλη (16,23%). Άλλα κύρια συστατικά του AEO περιλαμβάνουν την 1,8-κινεόλη (13,9%),κάμφορα(12,59%),λιναλοόλη(11,33%), α-πινένιο (7,21%), β-πινένιο (3,99%),θυμόλη(3,22%), καιμυρκένιο(2,02%). Η διακύμανση στη χημική σύνθεση μπορεί να σχετίζεται με τις περιβαλλοντικές συνθήκες στις οποίες εκτέθηκε το φυτό, όπως το μεταλλικό νερό, το ηλιακό φως, το στάδιο ανάπτυξης καιθρέψη.
-
Καθαρό λάδι Saposhnikovia divaricata για κεριά και σαπωνοποιία χονδρικής αιθέριο έλαιο διαχύτη νέο για διαχύτες καυστήρων καλαμιών
2.1. Προετοιμασία SDE
Τα ριζώματα του SD αγοράστηκαν ως αποξηραμένο βότανο από την Hanherb Co. (Guri, Κορέα). Τα φυτικά υλικά επιβεβαιώθηκαν ταξινομικά από τον Δρ. Go-Ya Choi του Κορεατικού Ινστιτούτου Ανατολικής Ιατρικής (KIOM). Ένα δείγμα κουπονιού (αριθμός 2014 SDE-6) κατατέθηκε στο Κορεατικό Βοτανικό Αρχείο Τυπικών Φυτικών Πόρων. Τα αποξηραμένα ριζώματα του SD (320 g) εκχυλίστηκαν δύο φορές με 70% αιθανόλη (με αναρροή 2 ωρών) και το εκχύλισμα στη συνέχεια συμπυκνώθηκε υπό μειωμένη πίεση. Το αφέψημα διηθήθηκε, λυοφιλοποιήθηκε και αποθηκεύτηκε στους 4°C. Η απόδοση του αποξηραμένου εκχυλίσματος από ακατέργαστα αρχικά υλικά ήταν 48,13% (β/β).
2.2. Ποσοτική Ανάλυση Υγρής Χρωματογραφίας Υψηλής Απόδοσης (HPLC)
Η χρωματογραφική ανάλυση πραγματοποιήθηκε με σύστημα HPLC (Waters Co., Milford, MA, ΗΠΑ) και ανιχνευτή συστοιχίας φωτοδιόδων. Για την ανάλυση HPLC του SDE, το πρωτεύονO-το πρότυπο γλυκοζυλοκιμιφουγίνης αγοράστηκε από το Κορεατικό Ινστιτούτο Προώθησης Βιομηχανίας Παραδοσιακής Ιατρικής (Gyeongsan, Κορέα) καιδευτ.-Ο-γλυκοζυλοχαμαυδόλη και 4'-O-β-D-γλυκοζυλ-5-OΗ μεθυλοβισαμμινόλη απομονώθηκε στο εργαστήριό μας και ταυτοποιήθηκε με φασματικές αναλύσεις, κυρίως με NMR και MS.
Δείγματα SDE (0,1 mg) διαλύθηκαν σε αιθανόλη 70% (10 mL). Ο χρωματογραφικός διαχωρισμός πραγματοποιήθηκε με στήλη XSelect HSS T3 C18 (4,6 × 250 mm, 5μm, Waters Co., Milford, MA, ΗΠΑ). Η κινητή φάση αποτελούνταν από ακετονιτρίλιο (Α) και 0,1% οξικό οξύ σε νερό (Β) με ρυθμό ροής 1,0 mL/min. Χρησιμοποιήθηκε ένα πρόγραμμα βαθμίδωσης πολλαπλών σταδίων ως εξής: 5% Α (0 λεπτά), 5–20% Α (0–10 λεπτά), 20% Α (10–23 λεπτά) και 20–65% Α (23–40 λεπτά). Το μήκος κύματος ανίχνευσης σαρώθηκε στα 210–400 nm και καταγράφηκε στα 254 nm. Ο όγκος έγχυσης ήταν 10,0μL. Παρασκευάστηκαν πρότυπα διαλύματα για τον προσδιορισμό τριών χρωμονών σε τελική συγκέντρωση 7,781 mg/mL (πρωτογενήςO-γλυκοζυλοκιμιφουγίνη), 31,125 mg/mL (4′-O-β-D-γλυκοζυλ-5-O-μεθυλοβισαμμινόλη), και 31,125 mg/mL (δευτ.-Ο-γλυκοζυλοχαμαυδόλη) σε μεθανόλη και διατηρείται στους 4°C.
2.3. Αξιολόγηση της αντιφλεγμονώδους δράσηςIn vitro
2.3.1. Κυτταροκαλλιέργεια και επεξεργασία δειγμάτων
Κύτταρα RAW 264.7 ελήφθησαν από την American Type Culture Collection (ATCC, Manassas, VA, ΗΠΑ) και αναπτύχθηκαν σε μέσο DMEM που περιείχε 1% αντιβιοτικά και 5,5% FBS. Τα κύτταρα επωάστηκαν σε υγροποιημένη ατμόσφαιρα 5% CO2 στους 37°C. Για την διέγερση των κυττάρων, το μέσο αντικαταστάθηκε με φρέσκο μέσο DMEM και λιποπολυσακχαρίτη (LPS, Sigma-Aldrich Chemical Co., St. Louis, MO, ΗΠΑ) στους 1°C.μg/mL προστέθηκε παρουσία ή απουσία SDE (200 ή 400μg/mL) για επιπλέον 24 ώρες.
2.3.2. Προσδιορισμός Μονοξειδίου του αζώτου (NO), Προσταγλανδίνης E2 (PGE2), Παράγοντα Νέκρωσης Όγκωνα(TNF-α), και παραγωγή ιντερλευκίνης-6 (IL-6)
Τα κύτταρα υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με SDE και διεγέρθηκαν με LPS για 24 ώρες. Η παραγωγή NO αναλύθηκε μετρώντας τα νιτρώδη χρησιμοποιώντας το αντιδραστήριο Griess σύμφωνα με προηγούμενη μελέτη [12]. Έκκριση των φλεγμονωδών κυτοκινών PGE2, TNF-α, και η IL-6 προσδιορίστηκε χρησιμοποιώντας ένα κιτ ELISA (συστήματα R&D) σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή. Οι επιδράσεις του SDE στην παραγωγή NO και κυτοκινών προσδιορίστηκαν στα 540 nm ή 450 nm χρησιμοποιώντας ένα Wallac EnVision.™συσκευή ανάγνωσης μικροπλακών (PerkinElmer).
2.4. Αξιολόγηση της δράσης κατά της οστεοαρθρίτιδαςΕν ζωή
2.4.1. Ζώα
Αρσενικοί αρουραίοι Sprague-Dawley (7 εβδομάδων) αγοράστηκαν από την Samtako Inc. (Osan, Κορέα) και στεγάστηκαν υπό ελεγχόμενες συνθήκες με 12ωρο κύκλο φωτός/σκότους σε°C και% υγρασίας. Στους αρουραίους χορηγήθηκε εργαστηριακή διατροφή και νερό.κατά βούλησηΌλες οι πειραματικές διαδικασίες πραγματοποιήθηκαν σύμφωνα με τις κατευθυντήριες γραμμές των Εθνικών Ινστιτούτων Υγείας (NIH) και εγκρίθηκαν από την Επιτροπή Φροντίδας και Χρήσης Ζώων του πανεπιστημίου Daejeon (Daejeon, Δημοκρατία της Κορέας).
2.4.2. Πρόκληση οστεοαρθρίτιδας με μυοκαρδιοπάθεια (MIA) σε αρουραίους
Τα ζώα τυχαιοποιήθηκαν και κατανεμήθηκαν σε ομάδες θεραπείας πριν από την έναρξη της μελέτης (ανά ομάδα). Διάλυμα MIA (3 mg/50μ1 λίτρο φυσιολογικού ορού 0,9%) εγχύθηκε απευθείας στον ενδοαρθρικό χώρο του δεξιού γόνατος υπό αναισθησία που προκλήθηκε με μείγμα κεταμίνης και ξυλαζίνης. Οι αρουραίοι χωρίστηκαν τυχαία σε τέσσερις ομάδες: (1) την ομάδα φυσιολογικού ορού χωρίς ένεση MIA, (2) την ομάδα MIA με ένεση MIA, (3) την ομάδα που έλαβε SDE (200 mg/kg) με ένεση MIA και (4) την ομάδα που έλαβε ινδομεθακίνη (IM-) (2 mg/kg) με ένεση MIA. Στους αρουραίους χορηγήθηκε από το στόμα SDE και IM 1 εβδομάδα πριν από την ένεση MIA για 4 εβδομάδες. Η δοσολογία SDE και IM που χρησιμοποιήθηκε σε αυτή τη μελέτη βασίστηκε σε εκείνες που χρησιμοποιήθηκαν σε προηγούμενες μελέτες [10,13,14].
2.4.3. Μετρήσεις της Κατανομής Βάρους στο Οπίσθιο Πόδι
Μετά την επαγωγή οστεοαρθρίτιδας, η αρχική ισορροπία στην ικανότητα φόρτισης βάρους των πίσω ποδιών διαταράχθηκε. Χρησιμοποιήθηκε ένας δοκιμαστής ανικανότητας (Linton instrumentation, Norfolk, UK) για την αξιολόγηση των αλλαγών στην ανοχή φόρτισης βάρους. Οι αρουραίοι τοποθετήθηκαν προσεκτικά στον θάλαμο μέτρησης. Η δύναμη φόρτισης βάρους που ασκείται από το πίσω άκρο υπολογίστηκε κατά μέσο όρο σε διάστημα 3 δευτερολέπτων. Η αναλογία κατανομής βάρους υπολογίστηκε με την ακόλουθη εξίσωση: [βάρος στο δεξί πίσω άκρο/(βάρος στο δεξί πίσω άκρο + βάρος στο αριστερό πίσω άκρο)] × 100 [15].
2.4.4. Μετρήσεις των επιπέδων κυτοκινών στον ορό
Τα δείγματα αίματος φυγοκεντρήθηκαν στα 1.500 g για 10 λεπτά στους 4°C. Στη συνέχεια, ο ορός συλλέχθηκε και αποθηκεύτηκε στους -70°C μέχρι τη χρήση του. Τα επίπεδα της IL-1β, IL-6, TNF-α, και η PGE2 στον ορό μετρήθηκαν χρησιμοποιώντας κιτ ELISA από την R&D Systems (Minneapolis, MN, ΗΠΑ) σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή.
2.4.5. Ποσοτική ανάλυση RT-PCR σε πραγματικό χρόνο
Το συνολικό RNA εκχυλίστηκε από τον ιστό της άρθρωσης του γονάτου χρησιμοποιώντας το αντιδραστήριο TRI® (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, ΗΠΑ), μεταγράφηκε αντίστροφα σε cDNA και ενισχύθηκε με PCR χρησιμοποιώντας ένα κιτ TM One Step RT PCR με πράσινο SYBR (Applied Biosystems, Grand Island, NY, ΗΠΑ). Η ποσοτική PCR σε πραγματικό χρόνο πραγματοποιήθηκε χρησιμοποιώντας το σύστημα Applied Biosystems 7500 Real-Time PCR (Applied Biosystems, Grand Island, NY, ΗΠΑ). Οι αλληλουχίες εκκινητών και η αλληλουχία ανιχνευτή παρουσιάζονται στον Πίνακα.1Κλάσματα δείγματος cDNA και ίση ποσότητα cDNA GAPDH ενισχύθηκαν με το κύριο μείγμα TaqMan® Universal PCR που περιείχε DNA πολυμεράση σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή (Applied Biosystems, Foster, CA, ΗΠΑ). Οι συνθήκες PCR ήταν 2 λεπτά στους 50°C, 10 λεπτά στους 94°C, 15 δευτερόλεπτα στους 95°C και 1 λεπτό στους 60°C για 40 κύκλους. Η συγκέντρωση του γονιδίου-στόχου προσδιορίστηκε χρησιμοποιώντας τη συγκριτική μέθοδο Ct (αριθμός κύκλου κατωφλίου στο σημείο διασταύρωσης μεταξύ γραφήματος ενίσχυσης και κατωφλίου), σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή.
