-
Οργανικό λάδι jojoba ψυχρής έκθλιψης λάδι φορέα σπόρων jojoba για μασάζ περιποίησης δέρματος
Τα κύρια συστατικά του φυσικού ελαίου Jojoba είναι το παλμιτικό οξύ, το ερουκικό οξύ, το ελαϊκό οξύ και το γαδολεϊκό οξύ. Το έλαιο jojoba είναι επίσης πλούσιο σε βιταμίνες όπως η βιταμίνη Ε και το σύμπλεγμα βιταμινών Β.
Το υγρό φυτικό κερί του φυτού Jojoba έχει χρυσαφί χρώμα. Το φυτικό λάδι Jojoba έχει ένα χαρακτηριστικό άρωμα ξηρών καρπών και είναι μια προτιμώμενη προσθήκη σε προϊόντα προσωπικής φροντίδας όπως κρέμες, μακιγιάζ, σαμπουάν κ.λπ. Το φυτικό φαρμακευτικό λάδι Jojoba μπορεί να εφαρμοστεί απευθείας στο δέρμα για ηλιακά εγκαύματα, ψωρίαση και ακμή. Το αγνό λάδι Jojoba προάγει επίσης την ανάπτυξη των μαλλιών.
-
Φυσικό Καθαρό Βιολογικό Αιθέριο Έλαιο Λεβάντας για την περιποίηση της επιδερμίδας στην αρωματοθεραπεία
Μέθοδος εκχύλισης ή επεξεργασίας: Αποσταγμένο με ατμό
Μέρος εξαγωγής απόσταξης: Λουλούδι
Προέλευση χώρας: Κίνα
Εφαρμογή: Διάχυτη/αρωματοθεραπεία/μασάζ
Διάρκεια ζωής: 3 χρόνια
Προσαρμοσμένη υπηρεσία: προσαρμοσμένη ετικέτα και κουτί ή σύμφωνα με τις απαιτήσεις σας
Πιστοποίηση: GMPC/FDA/ISO9001/MSDS/COA
-
100% καθαρό φυσικό βιολογικό αιθέριο έλαιο Magnoliae Officmalis Cortex Oil για την περιποίηση του δέρματος
Το άρωμα του Hou Po είναι αμέσως πικρό και έντονα πικάντικο και στη συνέχεια ανοίγει σταδιακά με μια βαθιά, σιροπιαστή γλυκύτητα και ζεστασιά.
Η συγγένεια του Hou Po είναι με τη Γη και τα μεταλλικά στοιχεία όπου η πικρή ζεστασιά δρα έντονα για να κατέβει το Qi και την ξηρή υγρασία. Λόγω αυτών των ιδιοτήτων, χρησιμοποιείται στην κινεζική ιατρική για την ανακούφιση της στασιμότητας και της συσσώρευσης στην πεπτική οδό, καθώς και του βήχα και του συριγμού λόγω φλεγμάτων που εμποδίζουν τους πνεύμονες.
Το Magnolia Officnials είναι ένα φυλλοβόλο δέντρο που προέρχεται από τα βουνά και τις κοιλάδες του Σιτσουάν, του Χουμπέι και άλλων επαρχιών της Κίνας. Ο εξαιρετικά αρωματικός φλοιός που χρησιμοποιείται στην παραδοσιακή κινεζική ιατρική αφαιρείται από τους μίσχους, τα κλαδιά και τις ρίζες που συλλέγονται από τον Απρίλιο έως τον Ιούνιο. Ο παχύς, λείος φλοιός, βαρύς με λάδι, έχει μωβ χρώμα στην εσωτερική πλευρά με κρύσταλλο γυαλάδα.
Οι επαγγελματίες μπορούν να εξετάσουν το ενδεχόμενο να συνδυάσουν το Hou Po με αιθέριο έλαιο Qing Pi ως κομπλιμέντο κορυφαίας νότας σε μείγματα που στοχεύουν στη διάσπαση των συσσωρεύσεων.
-
OEM Custom Package Natural Macrocephalae Rhizoma oil
Ως αποτελεσματικός χημειοθεραπευτικός παράγοντας, η 5-φθοροουρακίλη (5-FU) εφαρμόζεται ευρέως για τη θεραπεία κακοήθων όγκων στη γαστρεντερική οδό, στο κεφάλι, στον αυχένα, στο στήθος και στις ωοθήκες. Και το 5-FU είναι το φάρμακο πρώτης γραμμής για τον καρκίνο του παχέος εντέρου στην κλινική. Ο μηχανισμός δράσης του 5-FU είναι να εμποδίζει τον μετασχηματισμό του νουκλεϊκού οξέος ουρακίλης σε νουκλεϊκό οξύ θυμίνης στα καρκινικά κύτταρα και στη συνέχεια να επηρεάζει τη σύνθεση και την επιδιόρθωση του DNA και του RNA για να επιτευχθεί η κυτταροτοξική του δράση (Afzal et al., 2009, Ducreux et al. al., 2015; Longley et al., 2003). Ωστόσο, το 5-FU προκαλεί επίσης διάρροια που προκαλείται από χημειοθεραπεία (CID), μια από τις πιο συχνές ανεπιθύμητες ενέργειες που μαστίζει πολλούς ασθενείς (Filho et al., 2016). Η συχνότητα εμφάνισης διάρροιας σε ασθενείς που έλαβαν θεραπεία με 5-FU ήταν έως και 50%-80%, γεγονός που επηρέασε σοβαρά την πρόοδο και την αποτελεσματικότητα της χημειοθεραπείας (Iacovelli et al., 2014; Rosenoff et al., 2006). Συνεπώς, είναι σημαντικό να βρεθεί αποτελεσματική θεραπεία για CID που προκαλείται από 5-FU.
Επί του παρόντος, οι μη φαρμακευτικές παρεμβάσεις και οι φαρμακευτικές παρεμβάσεις έχουν εισαχθεί στην κλινική θεραπεία της CID. Οι μη φαρμακευτικές παρεμβάσεις περιλαμβάνουν λογική διατροφή και συμπλήρωμα με αλάτι, ζάχαρη και άλλα θρεπτικά συστατικά. Φάρμακα όπως η λοπεραμίδη και η οκτρεοτίδη χρησιμοποιούνται συνήθως στην αντιδιαρροϊκή θεραπεία του CID (Benson et al., 2004). Επιπλέον, υιοθετούνται επίσης εθνοϊατρικά για τη θεραπεία του CID με τη δική τους μοναδική θεραπεία σε διάφορες χώρες. Η παραδοσιακή κινεζική ιατρική (TCM) είναι μια τυπική εθνοϊατρική που εφαρμόζεται για περισσότερα από 2000 χρόνια σε χώρες της Ανατολικής Ασίας, συμπεριλαμβανομένης της Κίνας, της Ιαπωνίας και της Κορέας (Qi et al., 2010). Η TCM υποστηρίζει ότι τα χημειοθεραπευτικά φάρμακα θα προκαλούσαν κατανάλωση Qi, ανεπάρκεια σπλήνας, δυσαρμονία του στομάχου και ενδοφυτική υγρασία, με αποτέλεσμα τη δυσλειτουργία της αγώγιμης λειτουργίας των εντέρων. Στη θεωρία TCM, η στρατηγική θεραπείας του CID θα πρέπει να εξαρτάται κυρίως από τη συμπλήρωση Qi και την ενίσχυση της σπλήνας (Wang et al., 1994).
Οι αποξηραμένες ρίζες τουAtractylodes macrocephalaKoidz. (ΠΜ) καιPanax ginsengCA Mey. (PG) είναι τα τυπικά φυτικά φάρμακα στο TCM με τα ίδια αποτελέσματα συμπλήρωσης Qi και ενίσχυσης της σπλήνας (Li et al., 2014). Το AM και το PG χρησιμοποιούνται συνήθως ως ζεύγος βοτάνων (η απλούστερη μορφή συμβατότητας κινεζικών βοτάνων) με τα αποτελέσματα της συμπλήρωσης Qi και της ενίσχυσης της σπλήνας για τη θεραπεία της διάρροιας. Για παράδειγμα, η AM και η PG τεκμηριώθηκαν σε κλασικές αντιδιαρροϊκές φόρμουλες όπως Shen Ling Bai Zhu San, Si Jun Zi Tang απόTaiping Huimin Heji Ju Fang(Δυναστεία Song, Κίνα) και Bu Zhong Yi Qi Tang απόΠι Γουέι Λουν(Δυναστεία Γιουάν, Κίνα) (Εικ. 1). Αρκετές προηγούμενες μελέτες είχαν αναφέρει ότι και οι τρεις τύποι έχουν την ικανότητα να ανακουφίζουν το CID (Bai et al., 2017; Chen et al., 2019; Gou et al., 2016). Επιπλέον, η προηγούμενη μελέτη μας έδειξε ότι η κάψουλα Shenzhu που περιέχει μόνο AM και PG έχει πιθανές επιδράσεις στις θεραπείες της διάρροιας, της κολίτιδας (σύνδρομο xiexie) και άλλων γαστρεντερικών παθήσεων (Feng et al., 2018). Ωστόσο, καμία μελέτη δεν έχει συζητήσει την επίδραση και τον μηχανισμό της AM και της PG στη θεραπεία του CID, είτε σε συνδυασμό είτε μεμονωμένα.
Τώρα η μικροχλωρίδα του εντέρου θεωρείται πιθανός παράγοντας για την κατανόηση του θεραπευτικού μηχανισμού της TCM (Feng et al., 2019). Σύγχρονες μελέτες δείχνουν ότι η μικροχλωρίδα του εντέρου παίζει καθοριστικό ρόλο στη διατήρηση της εντερικής ομοιόστασης. Η υγιής μικροχλωρίδα του εντέρου συμβάλλει στην προστασία του εντερικού βλεννογόνου, στον μεταβολισμό, στην ομοιόσταση και απόκριση του ανοσοποιητικού συστήματος και στην καταστολή των παθογόνων (Thursby and Juge, 2017; Pickard et al., 2017). Η διαταραγμένη μικροχλωρίδα του εντέρου βλάπτει τις φυσιολογικές και ανοσολογικές λειτουργίες του ανθρώπινου σώματος άμεσα ή έμμεσα, προκαλώντας παρενέργειες όπως η διάρροια (Patel et al., 2016; Zhao and Shen, 2010). Έρευνες είχαν δείξει ότι το 5-FU άλλαξε αξιοσημείωτα τη δομή της μικροχλωρίδας του εντέρου σε ποντίκια με διάρροια (Li et al., 2017). Ως εκ τούτου, οι επιδράσεις των AM και PM στην επαγόμενη από 5-FU διάρροια μπορεί να προκαλούνται από τη μικροχλωρίδα του εντέρου. Ωστόσο, αν η AM και η PG μόνα τους και σε συνδυασμό θα μπορούσαν να αποτρέψουν τη διάρροια που προκαλείται από 5-FU ρυθμίζοντας τη μικροχλωρίδα του εντέρου είναι ακόμα άγνωστο.
Προκειμένου να διερευνήσουμε τις αντιδιαρροϊκές επιδράσεις και τον υποκείμενο μηχανισμό των AM και PG, χρησιμοποιήσαμε το 5-FU για να προσομοιώσουμε ένα μοντέλο διάρροιας σε ποντίκια. Εδώ, εστιάσαμε στις πιθανές επιδράσεις της εφάπαξ και συνδυασμένης χορήγησης (AP) τουAtractylodes macrocephalaαιθέριο έλαιο (AMO) καιPanax ginsengολικές σαπωνίνες (PGS), τα ενεργά συστατικά που εξάγονται αντίστοιχα από την AM και την PG, για τη διάρροια, την εντερική παθολογία και τη μικροβιακή δομή μετά από χημειοθεραπεία 5-FU.
-
100% καθαρό φυσικό Eucommiae Foliuml Oil αιθέριο έλαιο για την περιποίηση του δέρματος
Eucommia ulmoides(ΕΕ) (κοινώς αποκαλούμενο «Du Zhong» στην κινεζική γλώσσα) ανήκουν στην οικογένεια των Eucommiaceae, ένα γένος του μικρού δέντρου που προέρχεται από την Κεντρική Κίνα [1]. Αυτό το φυτό καλλιεργείται ευρέως στην Κίνα σε μεγάλη κλίμακα λόγω της φαρμακευτικής του σημασίας. Από την ΕΕ έχουν απομονωθεί περίπου 112 ενώσεις που περιλαμβάνουν λιγνάνες, ιριδοειδή, φαινολικά, στεροειδή και άλλες ενώσεις. Η συμπληρωματική φόρμουλα βοτάνων αυτού του φυτού (όπως το νόστιμο τσάι) έχει δείξει ορισμένες φαρμακευτικές ιδιότητες. Το φύλλο της ΕΕ έχει υψηλότερη δραστηριότητα που σχετίζεται με τον φλοιό, το λουλούδι και τον καρπό [2,3]. Τα φύλλα της ΕΕ έχει αναφερθεί ότι ενισχύουν τη δύναμη των οστών και τους μύες του σώματος [4], οδηγώντας έτσι στη μακροζωία και στην προώθηση της γονιμότητας στους ανθρώπους [5]. Η νόστιμη φόρμουλα τσαγιού που παρασκευάζεται από τα φύλλα της ΕΕ αναφέρθηκε ότι μειώνει την λιπαρότητα και ενισχύει τον ενεργειακό μεταβολισμό. Φλαβονοειδείς ενώσεις (όπως η ρουτίνη, το χλωρογενικό οξύ, το φερουλικό οξύ και το καφεϊκό οξύ) έχουν αναφερθεί ότι παρουσιάζουν αντιοξειδωτική δράση στα φύλλα της ΕΕ [1].6].
Αν και υπάρχει αρκετή βιβλιογραφία για τις φυτοχημικές ιδιότητες της ΕΕ, λίγες μελέτες ωστόσο υπήρξαν σχετικά με τις φαρμακολογικές ιδιότητες των διαφόρων ενώσεων που εξάγονται από τους φλοιούς, τους σπόρους, τους μίσχους και τα φύλλα της ΕΕ. Αυτό το έγγραφο ανασκόπησης θα αποσαφηνίσει λεπτομερείς πληροφορίες σχετικά με τις διάφορες ενώσεις που εξάγονται από τα διάφορα μέρη (φλοιός, σπόροι, στέλεχος και φύλλα) της ΕΕ και τις προοπτικές χρήσεις αυτών των ενώσεων σε ιδιότητες που προάγουν την υγεία με επιστημονικές γραμμές και θα παρέχει έτσι ένα υλικό αναφοράς για την εφαρμογή της Ε.Ε.
-
Καθαρό φυσικό λάδι Houttuynia cordata Oil Houttuynia Cordata Oil Lchthammolum
Στις περισσότερες από τις αναπτυσσόμενες χώρες, το 70-95% του πληθυσμού βασίζεται σε παραδοσιακά φάρμακα για πρωτοβάθμια φροντίδα υγείας και από αυτά το 85% των ανθρώπων χρησιμοποιεί φυτά ή τα εκχυλίσματά τους ως δραστική ουσία.1] Η αναζήτηση νέων βιολογικά ενεργών ενώσεων από φυτά συνήθως εξαρτάται από τις συγκεκριμένες εθνοτικές και λαϊκές πληροφορίες που λαμβάνονται από τοπικούς επαγγελματίες και εξακολουθεί να θεωρείται σημαντική πηγή για την ανακάλυψη φαρμάκων. Στην Ινδία, περίπου 2000 φάρμακα είναι φυτικής προέλευσης.[2] Λόγω του ευρέως διαδεδομένου ενδιαφέροντος για τη χρήση φαρμακευτικών φυτών, η παρούσα ανασκόπηση γιαHouttuynia cordataThunb. παρέχει ενημερωμένες πληροφορίες με αναφορά σε βοτανικές, εμπορικές, εθνοφαρμακολογικές, φυτοχημικές και φαρμακολογικές μελέτες που εμφανίζονται στη βιβλιογραφία.H. cordataThunb. ανήκει στην οικογένειαSaururaceaeκαι είναι κοινώς γνωστή ως κινεζική ουρά σαύρας. Είναι πολυετές βότανο με στολονοφόρο ρίζωμα που έχει δύο διακριτούς χημειότυπους.[3,4] Ο κινεζικός χημειότυπος του είδους βρίσκεται σε άγριες και ημιάγριες συνθήκες στη βορειοανατολική Ινδία από τον Απρίλιο έως τον Σεπτέμβριο.[5,6,7]H. cordataείναι διαθέσιμο στην Ινδία, ειδικά στην κοιλάδα του Μπραμαπούτρα του Ασάμ και χρησιμοποιείται από διάφορες φυλές του Ασάμ με τη μορφή λαχανικών καθώς και σε διάφορους ιατρικούς σκοπούς παραδοσιακά.
-
100% PureArctium lappa oil Manufacturer – Natural Lime Arctium lappa oil with Quality Assurance Certificates
Οφέλη για την υγεία
Η ρίζα της κολλιτσίδας τρώγεται συχνά, αλλά μπορεί επίσης να αποξηρανθεί και να εμποτιστεί σε τσάι. Λειτουργεί καλά ως πηγή ινουλίνης, απρεβιοτικόφυτικές ίνες που βοηθούν την πέψη και βελτιώνουν την υγεία του εντέρου. Επιπλέον, αυτή η ρίζα περιέχει φλαβονοειδή (θρεπτικά συστατικά των φυτών),φυτοχημικάκαι αντιοξειδωτικά που είναι γνωστό ότι έχουν οφέλη για την υγεία.
Επιπλέον, η ρίζα της κολλιτσίδας μπορεί να προσφέρει άλλα οφέλη όπως:
Μειώστε τη χρόνια φλεγμονή Η ρίζα της κολλιτσίδας περιέχει μια σειρά από αντιοξειδωτικά, όπως κερκετίνη, φαινολικά οξέα και λουτεολίνη, τα οποία μπορούν να βοηθήσουν στην προστασία των κυττάρων σας απόελεύθερες ρίζες. Αυτά τα αντιοξειδωτικά βοηθούν στη μείωση της φλεγμονής σε όλο το σώμα.
Κίνδυνοι για την υγεία
Η ρίζα της κολλιτσίδας θεωρείται ασφαλής για κατανάλωση ή κατανάλωση ως τσάι. Ωστόσο, αυτό το φυτό μοιάζει πολύ με τα φυτά νυχτολούλουδου belladonna, τα οποία είναι τοξικά. Συνιστάται να αγοράζετε ρίζα κολλιτσίδας μόνο από αξιόπιστους πωλητές και να αποφύγετε να τη συλλέξετε μόνοι σας. Επιπλέον, υπάρχουν ελάχιστες πληροφορίες για τις επιδράσεις του σε παιδιά ή έγκυες γυναίκες. Μιλήστε με το γιατρό σας πριν χρησιμοποιήσετε τη ρίζα κολλιτσίδας με παιδιά ή εάν είστε έγκυος.
Ακολουθούν ορισμένοι άλλοι πιθανοί κίνδυνοι για την υγεία που πρέπει να λάβετε υπόψη εάν χρησιμοποιείτε ρίζα κολλιτσίδας:
Αυξημένη αφυδάτωση
Η ρίζα της κολλιτσίδας δρα σαν φυσικό διουρητικό, το οποίο μπορεί να οδηγήσει σε αφυδάτωση. Εάν παίρνετε χάπια νερού ή άλλα διουρητικά, δεν πρέπει να πάρετε ρίζα κολλιτσίδας. Εάν παίρνετε αυτά τα φάρμακα, είναι σημαντικό να γνωρίζετε άλλα φάρμακα, βότανα και συστατικά που μπορεί να οδηγήσουν σε αφυδάτωση.
Αλλεργική Αντίδραση
Εάν είστε ευαίσθητοι ή έχετε ιστορικό αλλεργικών αντιδράσεων σε μαργαρίτες, αμβροσία ή χρυσάνθεμα, διατρέχετε αυξημένο κίνδυνο για αλλεργική αντίδραση στη ρίζα της κολλιτσίδας.
-
Χονδρική τιμή χονδρικής 100% Pure AsariRadix Et Rhizoma oil Relax Aromatherapy Eucalyptus globulus
Μελέτες σε ζώα και in vitro έχουν διερευνήσει τις πιθανές αντιμυκητιακές, αντιφλεγμονώδεις και καρδιαγγειακές επιδράσεις του sassafras και των συστατικών του. Ωστόσο, δεν υπάρχουν κλινικές δοκιμές και το sassafras δεν θεωρείται ασφαλές για χρήση. Η σαφρόλη, το κύριο συστατικό του φλοιού και του λαδιού της ρίζας sassafras, έχει απαγορευτεί από τον Οργανισμό Τροφίμων και Φαρμάκων των ΗΠΑ (FDA), ακόμη και για χρήση ως άρωμα ή άρωμα και δεν πρέπει να χρησιμοποιείται εσωτερικά ή εξωτερικά, καθώς είναι δυνητικά καρκινογόνο. Η σαφρόλη έχει χρησιμοποιηθεί για την παράνομη παραγωγή 3,4-μεθυλενο-διοξυμεθαμφεταμίνης (MDMA), γνωστής και με τα ονόματα των δρόμων «έκσταση» ή «Μόλι» και η πώληση ελαίου σαφρόλης και σασαφράς παρακολουθείται από την Υπηρεσία Δίωξης Ναρκωτικών των ΗΠΑ
-
Χονδρική τιμή χονδρικής 100% Pure Stellariae Radix αιθέριο έλαιο (νέο) Relax Aromatherapy Eucalyptus globulus
Η Κινεζική Φαρμακοποιία (έκδοση 2020) απαιτεί ότι το μεθανολικό εκχύλισμα του YCH δεν πρέπει να είναι μικρότερο από 20,0% [2], χωρίς να προσδιορίζονται άλλοι δείκτες αξιολόγησης ποιότητας. Τα αποτελέσματα αυτής της μελέτης δείχνουν ότι τα περιεχόμενα των μεθανολικών εκχυλισμάτων των άγριων και των καλλιεργούμενων δειγμάτων πληρούσαν και τα δύο το πρότυπο της φαρμακοποιίας και δεν υπήρχε σημαντική διαφορά μεταξύ τους. Ως εκ τούτου, δεν υπήρχε εμφανής διαφορά ποιότητας μεταξύ άγριων και καλλιεργούμενων δειγμάτων, σύμφωνα με αυτόν τον δείκτη. Ωστόσο, οι περιεκτικότητες σε ολικές στερόλες και ολικά φλαβονοειδή στα άγρια δείγματα ήταν σημαντικά υψηλότερες από αυτές στα καλλιεργούμενα δείγματα. Περαιτέρω μεταβολομική ανάλυση αποκάλυψε άφθονη ποικιλομορφία μεταβολιτών μεταξύ των άγριων και των καλλιεργούμενων δειγμάτων. Επιπλέον, εξετάστηκαν 97 σημαντικά διαφορετικοί μεταβολίτες, οι οποίοι παρατίθενται στοΣυμπληρωματικός Πίνακας S2. Μεταξύ αυτών των σημαντικά διαφορετικών μεταβολιτών είναι η β-σιτοστερόλη (το αναγνωριστικό είναι M397T42) και τα παράγωγα κερκετίνης (M447T204_2), τα οποία έχουν αναφερθεί ότι είναι δραστικά συστατικά. Συστατικά που δεν είχαν αναφερθεί προηγουμένως, όπως η τριγωνελίνη (M138T291_2), η βεταΐνη (M118T277_2), η φουστίνη (M269T36), η ροτενόνη (M241T189), η αρκτιίνη (M557T165) και το λογανικό οξύ (M49T) περιλαμβάνονταν επίσης μεταξύ των διαφορετικών μεταβολιτών. Αυτά τα συστατικά παίζουν διάφορους ρόλους στην αντιοξειδωτική, αντιφλεγμονώδη, σάρωση των ελεύθερων ριζών, κατά του καρκίνου και στη θεραπεία της αθηροσκλήρωσης και, ως εκ τούτου, μπορεί να αποτελούν υποτιθέμενα νέα ενεργά συστατικά στο YCH. Η περιεκτικότητα σε δραστικά συστατικά καθορίζει την αποτελεσματικότητα και την ποιότητα των φαρμακευτικών υλικών [7]. Συνοπτικά, το εκχύλισμα μεθανόλης ως ο μόνος δείκτης αξιολόγησης ποιότητας YCH έχει ορισμένους περιορισμούς και πιο συγκεκριμένοι δείκτες ποιότητας πρέπει να διερευνηθούν περαιτέρω. Υπήρχαν σημαντικές διαφορές στις συνολικές στερόλες, τα ολικά φλαβονοειδή και το περιεχόμενο πολλών άλλων διαφορικών μεταβολιτών μεταξύ της άγριας και της καλλιεργούμενης YCH. Έτσι, υπήρχαν δυνητικά κάποιες ποιοτικές διαφορές μεταξύ τους. Ταυτόχρονα, τα δυνητικά ενεργά συστατικά που ανακαλύφθηκαν πρόσφατα στο YCH ενδέχεται να έχουν μια σημαντική τιμή αναφοράς για τη μελέτη της λειτουργικής βάσης του YCH και την περαιτέρω ανάπτυξη των πόρων του YCH.
Η σημασία των γνήσιων φαρμακευτικών υλικών έχει αναγνωριστεί από καιρό στη συγκεκριμένη περιοχή προέλευσης για την παραγωγή κινεζικών φυτικών φαρμάκων εξαιρετικής ποιότητας [8]. Η υψηλή ποιότητα είναι ένα βασικό χαρακτηριστικό των γνήσιων φαρμακευτικών υλικών και ο βιότοπος είναι ένας σημαντικός παράγοντας που επηρεάζει την ποιότητα αυτών των υλικών. Από τότε που το YCH άρχισε να χρησιμοποιείται ως φάρμακο, κυριαρχεί εδώ και πολύ καιρό το άγριο YCH. Μετά την επιτυχή εισαγωγή και εξημέρωση του YCH στη Ningxia τη δεκαετία του 1980, η πηγή των φαρμακευτικών υλικών Yinchaihu μετατοπίστηκε σταδιακά από το άγριο στο καλλιεργημένο YCH. Σύμφωνα με προηγούμενη έρευνα σε πηγές YCH [9] και την επιτόπια έρευνα της ερευνητικής μας ομάδας, υπάρχουν σημαντικές διαφορές στις περιοχές διανομής των καλλιεργούμενων και άγριων φαρμακευτικών υλικών. Το άγριο YCH διανέμεται κυρίως στην αυτόνομη περιοχή Ningxia Hui της επαρχίας Shaanxi, δίπλα στην άνυδρη ζώνη της Εσωτερικής Μογγολίας και της κεντρικής Ningxia. Ειδικότερα, η στέπα της ερήμου σε αυτές τις περιοχές είναι ο καταλληλότερος βιότοπος για την ανάπτυξη YCH. Αντίθετα, το καλλιεργούμενο YCH διανέμεται κυρίως στα νότια της περιοχής εξάπλωσης της άγριας φύσης, όπως η κομητεία Tongxin (Καλλιέργεια I) και οι γύρω περιοχές, η οποία έχει γίνει η μεγαλύτερη βάση καλλιέργειας και παραγωγής στην Κίνα και η κομητεία Pengyang (Καλλιεργημένη II) , που βρίσκεται σε πιο νότια περιοχή και αποτελεί άλλη μια περιοχή παραγωγής για την καλλιεργούμενη ΥΧ. Επιπλέον, οι βιότοποι των δύο παραπάνω καλλιεργούμενων περιοχών δεν είναι ερημική στέπα. Επομένως, εκτός από τον τρόπο παραγωγής, υπάρχουν και σημαντικές διαφορές στον βιότοπο της άγριας και καλλιεργούμενης ΥΧ. Ο βιότοπος είναι ένας σημαντικός παράγοντας που επηρεάζει την ποιότητα των φυτικών φαρμακευτικών υλικών. Τα διαφορετικά ενδιαιτήματα θα επηρεάσουν τον σχηματισμό και τη συσσώρευση δευτερογενών μεταβολιτών στα φυτά, επηρεάζοντας έτσι την ποιότητα των φαρμακευτικών προϊόντων [10,11]. Ως εκ τούτου, οι σημαντικές διαφορές στα περιεχόμενα των συνολικών φλαβονοειδών και των συνολικών στερολών και η έκφραση των 53 μεταβολιτών που βρήκαμε σε αυτή τη μελέτη μπορεί να είναι αποτέλεσμα της διαχείρισης αγρού και των διαφορών των ενδιαιτημάτων.Ένας από τους κύριους τρόπους με τους οποίους το περιβάλλον επηρεάζει την ποιότητα των φαρμακευτικών υλικών είναι η άσκηση πίεσης στα φυτά προέλευσης. Το μέτριο περιβαλλοντικό στρες τείνει να διεγείρει τη συσσώρευση δευτερογενών μεταβολιτών [12,13]. Η υπόθεση του ισοζυγίου ανάπτυξης/διαφοροποίησης δηλώνει ότι, όταν τα θρεπτικά συστατικά είναι σε επαρκή ποσότητα, τα φυτά αναπτύσσονται κυρίως, ενώ όταν τα θρεπτικά συστατικά είναι ελλιπή, τα φυτά διαφοροποιούνται κυρίως και παράγουν περισσότερους δευτερογενείς μεταβολίτες.14]. Το στρες ξηρασίας που προκαλείται από την έλλειψη νερού είναι η κύρια περιβαλλοντική πίεση που αντιμετωπίζουν τα φυτά σε ξηρές περιοχές. Σε αυτή τη μελέτη, η κατάσταση του νερού του καλλιεργούμενου YCH είναι πιο άφθονη, με ετήσια επίπεδα βροχόπτωσης σημαντικά υψηλότερα από εκείνα για την άγρια YCH (η παροχή νερού για το Cultivated I ήταν περίπου 2 φορές εκείνη του Wild· το Cultivated II ήταν περίπου 3,5 φορές εκείνη του Wild ). Επιπλέον, το έδαφος στο άγριο περιβάλλον είναι αμμώδες έδαφος, αλλά το έδαφος στις γεωργικές εκτάσεις είναι αργιλώδες. Σε σύγκριση με τον άργιλο, το αμμώδες έδαφος έχει χαμηλή ικανότητα συγκράτησης νερού και είναι πιο πιθανό να επιδεινώσει το άγχος της ξηρασίας. Ταυτόχρονα, η διαδικασία καλλιέργειας συχνά συνοδεύτηκε από πότισμα, με αποτέλεσμα ο βαθμός ξηρασίας να είναι χαμηλός. Το Wild YCH αναπτύσσεται σε σκληρούς φυσικούς άνυδρους οικοτόπους και ως εκ τούτου μπορεί να υποστεί πιο σοβαρό στρες ξηρασίας.Η ωσμορύθμιση είναι ένας σημαντικός φυσιολογικός μηχανισμός μέσω του οποίου τα φυτά αντιμετωπίζουν το στρες της ξηρασίας και τα αλκαλοειδή είναι σημαντικοί ωσμωτικοί ρυθμιστές στα ανώτερα φυτά.15]. Οι βεταϊνες είναι υδατοδιαλυτές αλκαλοειδείς ενώσεις τεταρτοταγούς αμμωνίου και μπορούν να δράσουν ως οσμοπροστατευτικά. Το στρες ξηρασίας μπορεί να μειώσει το οσμωτικό δυναμικό των κυττάρων, ενώ τα οσμωπροστατευτικά διατηρούν και διατηρούν τη δομή και την ακεραιότητα των βιολογικών μακρομορίων και ανακουφίζουν αποτελεσματικά τη ζημιά που προκαλείται από το στρες ξηρασίας στα φυτά.16]. Για παράδειγμα, υπό συνθήκες ξηρασίας, η περιεκτικότητα σε βεταΐνη του ζαχαρότευτλου και του Lycium barbarum αυξήθηκε σημαντικά [17,18]. Η τριγωνελίνη είναι ρυθμιστής της κυτταρικής ανάπτυξης και υπό συνθήκες ξηρασίας, μπορεί να επεκτείνει τη διάρκεια του κύκλου των φυτών, να αναστείλει την κυτταρική ανάπτυξη και να οδηγήσει σε συρρίκνωση του όγκου των κυττάρων. Η σχετική αύξηση της συγκέντρωσης διαλυμένης ουσίας στο κύτταρο επιτρέπει στο φυτό να επιτύχει οσμωτική ρύθμιση και να ενισχύει την ικανότητά του να αντιστέκεται στο στρες της ξηρασίας.19]. JIA X [20] διαπίστωσε ότι, με την αύξηση του στρες ξηρασίας, το Astragalus membranaceus (πηγή παραδοσιακής κινεζικής ιατρικής) παρήγαγε περισσότερη τριγωνελίνη, η οποία δρα στη ρύθμιση του οσμωτικού δυναμικού και στη βελτίωση της ικανότητας αντίστασης στο στρες της ξηρασίας. Τα φλαβονοειδή έχει επίσης αποδειχθεί ότι διαδραματίζουν σημαντικό ρόλο στην αντοχή των φυτών στο στρες της ξηρασίας.21,22]. Ένας μεγάλος αριθμός μελετών έχει επιβεβαιώσει ότι το μέτριο στρες ξηρασίας ευνοούσε τη συσσώρευση φλαβονοειδών. Οι Lang Duo-Yong et al. [23] συνέκρινε τις επιπτώσεις της ξηρασίας στο YCH ελέγχοντας την ικανότητα συγκράτησης νερού στο χωράφι. Διαπιστώθηκε ότι το στρες ξηρασίας ανέστειλε την ανάπτυξη των ριζών σε κάποιο βαθμό, αλλά σε μέτρια και σοβαρή ξηρασία (40% ικανότητα συγκράτησης νερού στον αγρό), η συνολική περιεκτικότητα σε φλαβονοειδή στο YCH αυξήθηκε. Εν τω μεταξύ, υπό το στρες ξηρασίας, οι φυτοστερόλες μπορούν να δράσουν για να ρυθμίσουν τη ρευστότητα και τη διαπερατότητα της κυτταρικής μεμβράνης, να αναστείλουν την απώλεια νερού και να βελτιώσουν την αντίσταση στο στρες.24,25]. Επομένως, η αυξημένη συσσώρευση ολικών φλαβονοειδών, ολικών στερολών, βεταΐνης, τριγωνελίνης και άλλων δευτερογενών μεταβολιτών στο άγριο YCH μπορεί να σχετίζεται με στρες ξηρασίας υψηλής έντασης.Σε αυτή τη μελέτη, πραγματοποιήθηκε ανάλυση εμπλουτισμού της οδού KEGG στους μεταβολίτες που βρέθηκαν να διαφέρουν σημαντικά μεταξύ της άγριας και της καλλιεργούμενης YCH. Οι εμπλουτισμένοι μεταβολίτες περιελάμβαναν εκείνους που εμπλέκονται στις οδούς του μεταβολισμού ασκορβικού και αλδαρινικού, στη βιοσύνθεση αμινοακυλο-tRNA, στο μεταβολισμό της ιστιδίνης και στο μεταβολισμό της βήτα-αλανίνης. Αυτά τα μεταβολικά μονοπάτια σχετίζονται στενά με τους μηχανισμούς αντοχής των φυτών στο στρες. Μεταξύ αυτών, ο μεταβολισμός του ασκορβικού παίζει σημαντικό ρόλο στην παραγωγή αντιοξειδωτικών φυτών, στον μεταβολισμό του άνθρακα και του αζώτου, στην αντίσταση στο στρες και σε άλλες φυσιολογικές λειτουργίες.26]; Η βιοσύνθεση αμινοακυλο-tRNA είναι μια σημαντική οδός για τον σχηματισμό πρωτεϊνών [27,28], η οποία εμπλέκεται στη σύνθεση πρωτεϊνών ανθεκτικών στο στρες. Τόσο οι οδοί της ιστιδίνης όσο και της β-αλανίνης μπορούν να ενισχύσουν την ανεκτικότητα των φυτών στο περιβαλλοντικό στρες [29,30]. Αυτό δείχνει περαιτέρω ότι οι διαφορές στους μεταβολίτες μεταξύ του άγριου και του καλλιεργημένου YCH σχετίζονταν στενά με τις διαδικασίες αντοχής στο στρες.Το έδαφος είναι η υλική βάση για την ανάπτυξη και την ανάπτυξη των φαρμακευτικών φυτών. Το άζωτο (Ν), ο φώσφορος (Ρ) και το κάλιο (Κ) στο έδαφος είναι σημαντικά θρεπτικά στοιχεία για την ανάπτυξη και την ανάπτυξη των φυτών. Η οργανική ύλη του εδάφους περιέχει επίσης N, P, K, Zn, Ca, Mg και άλλα μακροστοιχεία και ιχνοστοιχεία που απαιτούνται για τα φαρμακευτικά φυτά. Τα υπερβολικά ή ελλιπή θρεπτικά συστατικά ή οι μη ισορροπημένες αναλογίες θρεπτικών ουσιών θα επηρεάσουν την ανάπτυξη και την ανάπτυξη και την ποιότητα των φαρμακευτικών υλικών, και διαφορετικά φυτά έχουν διαφορετικές απαιτήσεις σε θρεπτικά συστατικά.31,32,33]. Για παράδειγμα, ένα χαμηλό στρες Ν προήγαγε τη σύνθεση αλκαλοειδών στο Isatis indigotica και ήταν ευεργετικό για τη συσσώρευση φλαβονοειδών σε φυτά όπως το Tetrastigma hemsleyanum, το Crataegus pinnatifida Bunge και το Dichondra repens Forst. Αντίθετα, πάρα πολύ Ν ανέστειλε τη συσσώρευση φλαβονοειδών σε είδη όπως το Erigeron breviscapus, το Abrus cantoniensis και το Ginkgo biloba και επηρέασε την ποιότητα των φαρμακευτικών υλικών.34]. Η εφαρμογή λιπάσματος P ήταν αποτελεσματική στην αύξηση της περιεκτικότητας σε γλυκυρριζικό οξύ και διυδροακετόνη στη γλυκόριζα Ural [35]. Όταν η ποσότητα εφαρμογής ξεπέρασε τα 0,12 kg·m−2, η συνολική περιεκτικότητα σε φλαβονοειδή στο Tussilago farfara μειώθηκε [36]. Η εφαρμογή ενός λιπάσματος P είχε αρνητική επίδραση στην περιεκτικότητα σε πολυσακχαρίτες στην παραδοσιακή κινεζική ιατρική rhizoma polygonati [37], αλλά ένα λίπασμα Κ ήταν αποτελεσματικό στην αύξηση της περιεκτικότητάς του σε σαπωνίνες [38]. Η εφαρμογή λιπάσματος 450 kg·hm−2 K ήταν η καλύτερη για την ανάπτυξη και τη συσσώρευση σαπωνίνης του Panax notoginseng ηλικίας δύο ετών [39]. Κάτω από την αναλογία N:P:K = 2:2:1, οι συνολικές ποσότητες υδροθερμικού εκχυλίσματος, αρπαγίδης και αρπαγοσίδης ήταν οι υψηλότερες [40]. Η υψηλή αναλογία N, P και K ήταν ευεργετική για την προώθηση της ανάπτυξης του Pogostemon cablin και την αύξηση της περιεκτικότητας σε πτητικό λάδι. Μια χαμηλή αναλογία N, P και K αύξησε την περιεκτικότητα των κύριων αποτελεσματικών συστατικών του ελαίου βλαστοκυττάρων Pogostemon [41]. Το YCH είναι φυτό ανθεκτικό στο άγονο έδαφος και μπορεί να έχει συγκεκριμένες απαιτήσεις για θρεπτικά συστατικά όπως το N, P και K. Σε αυτή τη μελέτη, σε σύγκριση με το καλλιεργούμενο YCH, το έδαφος των άγριων φυτών YCH ήταν σχετικά άγονο: το περιεχόμενο του εδάφους οργανικής ύλης, το συνολικό Ν, το ολικό Ρ και το ολικό Κ ήταν περίπου 1/10, 1/2, 1/3 και 1/3 αυτών των καλλιεργούμενων φυτών, αντίστοιχα. Επομένως, οι διαφορές στα θρεπτικά συστατικά του εδάφους μπορεί να είναι ένας άλλος λόγος για τις διαφορές μεταξύ των μεταβολιτών που ανιχνεύονται στο καλλιεργούμενο και στο άγριο YCH. Weibao Ma et al. [42] διαπίστωσε ότι η εφαρμογή ορισμένης ποσότητας λιπάσματος Ν και λιπάσματος P βελτίωσε σημαντικά την απόδοση και την ποιότητα των σπόρων. Ωστόσο, η επίδραση των θρεπτικών στοιχείων στην ποιότητα του YCH δεν είναι σαφής και τα μέτρα λίπανσης για τη βελτίωση της ποιότητας των φαρμακευτικών υλικών χρειάζονται περαιτέρω μελέτη.Τα κινεζικά φυτικά φάρμακα έχουν τα χαρακτηριστικά των «ευνοϊκών οικοτόπων προάγουν την απόδοση και τα δυσμενή ενδιαιτήματα βελτιώνουν την ποιότητα» [43]. Στη διαδικασία της σταδιακής μετάβασης από την άγρια σε καλλιεργούμενη ΥCH, ο βιότοπος των φυτών άλλαξε από την άνυδρη και άγονη στέπα της ερήμου σε εύφορη γεωργική γη με περισσότερο άφθονο νερό. Ο βιότοπος του καλλιεργούμενου YCH είναι ανώτερος και η απόδοση είναι υψηλότερη, κάτι που βοηθά στην κάλυψη της ζήτησης της αγοράς. Ωστόσο, αυτός ο ανώτερος βιότοπος οδήγησε σε σημαντικές αλλαγές στους μεταβολίτες του YCH. Το εάν αυτό συμβάλλει στη βελτίωση της ποιότητας του YCH και πώς να επιτευχθεί μια υψηλής ποιότητας παραγωγή YCH μέσω επιστημονικών καλλιεργητικών μέτρων θα απαιτήσει περαιτέρω έρευνα.Η προσομοιωτική καλλιέργεια ενδιαιτημάτων είναι μια μέθοδος προσομοίωσης του οικοτόπου και των περιβαλλοντικών συνθηκών των άγριων φαρμακευτικών φυτών, που βασίζεται στη γνώση της μακροπρόθεσμης προσαρμογής των φυτών σε συγκεκριμένες περιβαλλοντικές πιέσεις.43]. Με την προσομοίωση διάφορων περιβαλλοντικών παραγόντων που επηρεάζουν τα άγρια φυτά, ειδικά τον αρχικό βιότοπο των φυτών που χρησιμοποιούνται ως πηγές αυθεντικών φαρμακευτικών υλικών, η προσέγγιση χρησιμοποιεί επιστημονικό σχεδιασμό και καινοτόμο ανθρώπινη παρέμβαση για να εξισορροπήσει την ανάπτυξη και τον δευτερογενή μεταβολισμό των κινεζικών φαρμακευτικών φυτών.43]. Οι μέθοδοι στοχεύουν στην επίτευξη των βέλτιστων διευθετήσεων για την ανάπτυξη ιατρικών υλικών υψηλής ποιότητας. Η προσομοιωτική καλλιέργεια ενδιαιτημάτων θα πρέπει να παρέχει έναν αποτελεσματικό τρόπο για την υψηλής ποιότητας παραγωγή YCH ακόμη και όταν η φαρμακοδυναμική βάση, οι δείκτες ποιότητας και οι μηχανισμοί απόκρισης στους περιβαλλοντικούς παράγοντες είναι ασαφείς. Αντίστοιχα, προτείνουμε να πραγματοποιηθούν μέτρα επιστημονικού σχεδιασμού και διαχείρισης πεδίου στην καλλιέργεια και παραγωγή YCH με αναφορά στα περιβαλλοντικά χαρακτηριστικά του άγριου YCH, όπως οι συνθήκες ξηρού, άγονου και αμμώδους εδάφους. Ταυτόχρονα, ελπίζεται επίσης ότι οι ερευνητές θα διεξαγάγουν πιο εις βάθος έρευνα σχετικά με τη λειτουργική υλική βάση και τους δείκτες ποιότητας του YCH. Αυτές οι μελέτες μπορούν να παρέχουν πιο αποτελεσματικά κριτήρια αξιολόγησης για το YCH και να προωθήσουν την παραγωγή υψηλής ποιότητας και τη βιώσιμη ανάπτυξη του κλάδου. -
Herbal Fructus Amomi oil Φυσικό μασάζ Diffusers 1kg Αιθέριο έλαιο Bulk Amomum villosum
Η οικογένεια Zingiberaceae έχει προσελκύσει αυξανόμενη προσοχή στην αλληλοπαθητική έρευνα λόγω των πλούσιων πτητικών ελαίων και της αρωματικότητας των ειδών-μελών της. Προηγούμενη έρευνα είχε δείξει ότι οι χημικές ουσίες από το Curcuma zedoaria (zedoary) [40], Alpinia zerumbet (Pers.) BLBurtt & RMSm. [41] και Zingiber officinale Rosc. [42] της οικογένειας τζίντζερ έχουν αλλοπαθητικές επιδράσεις στη βλάστηση των σπόρων και στην ανάπτυξη των φυταρίων του καλαμποκιού, του μαρουλιού και της ντομάτας. Η τρέχουσα μελέτη μας είναι η πρώτη αναφορά σχετικά με την αλλοπαθητική δραστηριότητα των πτητικών από στελέχη, φύλλα και νεαρούς καρπούς του A. villosum (μέλος της οικογένειας Zingiberaceae). Η απόδοση ελαίου στους μίσχους, τα φύλλα και τους νεαρούς καρπούς ήταν 0,15%, 0,40% και 0,50%, αντίστοιχα, υποδεικνύοντας ότι οι καρποί παρήγαγαν μεγαλύτερη ποσότητα πτητικών ελαίων από τους μίσχους και τα φύλλα. Τα κύρια συστατικά των πτητικών ελαίων από τους μίσχους ήταν το β-πινένιο, το β-φελανδρένιο και το α-πινένιο, το οποίο ήταν ένα μοτίβο παρόμοιο με αυτό των κύριων χημικών ουσιών του φυλλέλαιου, το β-πινένιο και το α-πινένιο (μονοτερπενικοί υδρογονάνθρακες). Από την άλλη, το λάδι στα νεαρά φρούτα ήταν πλούσιο σε οξικό βορνύλιο και καμφορά (οξυγονωμένα μονοτερπένια). Τα αποτελέσματα υποστηρίχθηκαν από τα ευρήματα του Do N Dai [30,32] και Χούι Άο [31] που είχε εντοπίσει τα έλαια από διαφορετικά όργανα του A. villosum.
Έχουν υπάρξει αρκετές αναφορές για τις ανασταλτικές δραστηριότητες της ανάπτυξης των φυτών αυτών των κύριων ενώσεων σε άλλα είδη. Ο Shalinder Kaur διαπίστωσε ότι το α-πινένιο από τον ευκάλυπτο κατέστειλε εμφανώς το μήκος ρίζας και το ύψος του βλαστού του Amaranthus viridis L. σε συγκέντρωση 1,0 μL [43], και μια άλλη μελέτη έδειξε ότι το α-πινένιο ανέστειλε την πρώιμη ανάπτυξη της ρίζας και προκάλεσε οξειδωτική βλάβη στον ιστό της ρίζας μέσω της αυξημένης παραγωγής αντιδραστικών ειδών οξυγόνου [44]. Ορισμένες αναφορές έχουν υποστηρίξει ότι το β-πινένιο ανέστειλε τη βλάστηση και την ανάπτυξη των φυταρίων των δοκιμαστικών ζιζανίων με τρόπο δοσοεξαρτώμενο απόκρισης, διαταράσσοντας την ακεραιότητα της μεμβράνης [1].45], αλλάζοντας τη βιοχημεία των φυτών και ενισχύοντας τις δραστηριότητες των υπεροξειδασών και των οξειδασών πολυφαινόλης [46]. Το β-φελανδρένιο επέδειξε μέγιστη αναστολή στη βλάστηση και ανάπτυξη του Vigna unguiculata (L.) Walp σε συγκέντρωση 600 ppm [47], ενώ, σε συγκέντρωση 250 mg/m3, η καμφορά κατέστειλε την ανάπτυξη των ριζών και των βλαστών του Lepidium sativum L. [48]. Ωστόσο, η έρευνα που αναφέρει την αλλοπαθητική επίδραση του οξικού βορνυλεστέρα είναι ελάχιστη. Στη μελέτη μας, τα αλλοπαθητικά αποτελέσματα του β-πινενίου, του οξικού βορνυλεστέρα και της καμφοράς στο μήκος της ρίζας ήταν πιο αδύναμα από ό,τι για τα πτητικά έλαια εκτός από το α-πινένιο, ενώ το φυλλικό λάδι, πλούσιο σε α-πινένιο, ήταν επίσης πιο φυτοτοξικό από το αντίστοιχο πτητικό έλαια από τους μίσχους και τους καρπούς του A. villosum, και τα δύο ευρήματα δείχνουν ότι το α-πινένιο μπορεί να είναι η σημαντική χημική ουσία για την αλληλοπάθεια αυτού του είδους. Ταυτόχρονα, τα αποτελέσματα υποδηλώνουν επίσης ότι ορισμένες ενώσεις στο φρουτέλαιο που δεν ήταν άφθονες μπορεί να συμβάλλουν στην παραγωγή της φυτοτοξικής δράσης, εύρημα που χρήζει περαιτέρω έρευνας στο μέλλον.Υπό κανονικές συνθήκες, η αλληλοπαθητική επίδραση των αλληλοχημικών ουσιών είναι ειδική για το είδος. Οι Jiang et al. διαπίστωσε ότι το αιθέριο έλαιο που παράγεται από την Artemisia sieversiana άσκησε πιο ισχυρή επίδραση στο Amaranthus retroflexus L. από ότι στο Medicago sativa L., Poa annua L. και Pennisetum alopecuroides (L.) Spreng. [49]. Σε μια άλλη μελέτη, το πτητικό λάδι Lavandula angustifolia Mill. προκάλεσε διαφορετικούς βαθμούς φυτοτοξικών επιδράσεων σε διαφορετικά είδη φυτών. Lolium multiflorum Lam. ήταν το πιο ευαίσθητο είδος αποδέκτη, η ανάπτυξη υποκοτυλίου και ριζών αναστέλλεται κατά 87,8% και 76,7%, αντίστοιχα, σε δόση 1 μL/mL ελαίων, αλλά η ανάπτυξη υποκοτυλίου των φυταρίων αγγουριού ελάχιστα επηρεάστηκε [20]. Τα αποτελέσματά μας έδειξαν επίσης ότι υπήρχε διαφορά στην ευαισθησία στα πτητικά A. villosum μεταξύ L. sativa και L. perenne.Οι πτητικές ενώσεις και τα αιθέρια έλαια του ίδιου είδους μπορεί να ποικίλλουν ποσοτικά ή/και ποιοτικά λόγω των συνθηκών ανάπτυξης, των μερών των φυτών και των μεθόδων ανίχνευσης. Για παράδειγμα, μια έκθεση έδειξε ότι το πυρανοειδές (10,3%) και το β-καρυοφυλλένιο (6,6%) ήταν οι κύριες ενώσεις των πτητικών που εκπέμπονταν από τα φύλλα του Sambucus nigra, ενώ η βενζαλδεΰδη (17,8%), η α-βουλνεσίνη (16,6%) και η τετρακοζάνη (11,5%) ήταν άφθονα στα έλαια που εξάγονταν από τα φύλλα [50]. Στη μελέτη μας, οι πτητικές ενώσεις που απελευθερώνονται από τα φρέσκα φυτικά υλικά είχαν ισχυρότερα αλλοπαθητικά αποτελέσματα στα υπό δοκιμή φυτά από τα εκχυλισμένα πτητικά έλαια, ενώ οι διαφορές στην απόκριση σχετίζονται στενά με τις διαφορές στις αλληλοχημικές ουσίες που υπάρχουν στα δύο παρασκευάσματα. Οι ακριβείς διαφορές μεταξύ πτητικών ενώσεων και ελαίων πρέπει να διερευνηθούν περαιτέρω σε επόμενα πειράματα.Οι διαφορές στη μικροβιακή ποικιλότητα και τη δομή της μικροβιακής κοινότητας στα δείγματα εδάφους στα οποία είχαν προστεθεί πτητικά έλαια σχετίζονταν με τον ανταγωνισμό μεταξύ των μικροοργανισμών καθώς και με τυχόν τοξικές επιδράσεις και τη διάρκεια των πτητικών ελαίων στο έδαφος. Βώκου και Λιωτήρη [51] διαπίστωσε ότι η αντίστοιχη εφαρμογή τεσσάρων αιθέριων ελαίων (0,1 mL) σε καλλιεργούμενο έδαφος (150 g) ενεργοποίησε την αναπνοή των δειγμάτων του εδάφους, ακόμη και τα έλαια διέφεραν στη χημική τους σύνθεση, υποδηλώνοντας ότι τα φυτικά έλαια χρησιμοποιούνται ως πηγή άνθρακα και ενέργειας από υπάρχοντες μικροοργανισμοί του εδάφους. Τα δεδομένα που ελήφθησαν από την τρέχουσα μελέτη επιβεβαίωσαν ότι τα έλαια από ολόκληρο το φυτό του A. villosum συνέβαλαν στην προφανή αύξηση του αριθμού των μυκητιακών ειδών του εδάφους έως την 14η ημέρα μετά την προσθήκη λαδιού, υποδεικνύοντας ότι το έλαιο μπορεί να παρέχει την πηγή άνθρακα για περισσότερα μύκητες του εδάφους. Μια άλλη μελέτη ανέφερε ένα εύρημα: οι μικροοργανισμοί του εδάφους ανάκτησαν την αρχική τους λειτουργία και τη βιομάζα μετά από μια προσωρινή περίοδο διακύμανσης που προκλήθηκε από την προσθήκη ελαίου Thymbra capitata L. (Cav), αλλά το έλαιο στην υψηλότερη δόση (0,93 µL λάδι ανά γραμμάριο εδάφους) δεν επέτρεψε στους μικροοργανισμούς του εδάφους να ανακτήσουν την αρχική λειτουργικότητα [52]. Στην τρέχουσα μελέτη, με βάση τη μικροβιολογική ανάλυση του εδάφους μετά την επεξεργασία με διαφορετικές ημέρες και συγκεντρώσεις, υποθέσαμε ότι η βακτηριακή κοινότητα του εδάφους θα ανακάμψει μετά από περισσότερες ημέρες. Αντίθετα, η μυκητιακή μικροχλωρίδα δεν μπορεί να επιστρέψει στην αρχική της κατάσταση. Τα ακόλουθα αποτελέσματα επιβεβαιώνουν αυτή την υπόθεση: η ευδιάκριτη επίδραση της υψηλής συγκέντρωσης του ελαίου στη σύνθεση του μυκητιακού μικροβιώματος του εδάφους αποκαλύφθηκε από την ανάλυση βασικών συντεταγμένων (PCoA) και οι παρουσιάσεις του θερμικού χάρτη επιβεβαίωσαν και πάλι ότι η σύνθεση της μυκητιακής κοινότητας του εδάφους που υποβλήθηκε σε επεξεργασία με 3,0 mg/mL ελαίου (δηλαδή 0,375 mg ελαίου ανά γραμμάριο εδάφους) στο επίπεδο του γένους διέφερε σημαντικά από τις άλλες θεραπείες. Επί του παρόντος, η έρευνα σχετικά με τις επιδράσεις της προσθήκης μονοτερπενικών υδρογονανθράκων ή οξυγονωμένων μονοτερπενίων στη μικροβιακή ποικιλότητα του εδάφους και στη δομή της κοινότητας είναι ακόμη σπάνια. Μερικές μελέτες ανέφεραν ότι το α-πινένιο αύξησε τη μικροβιακή δραστηριότητα του εδάφους και τη σχετική αφθονία των Methylophilaceae (ομάδα μεθυλοτρόφων, Proteobacteria) κάτω από χαμηλή περιεκτικότητα σε υγρασία, παίζοντας σημαντικό ρόλο ως πηγή άνθρακα σε ξηρότερα εδάφη.53]. Ομοίως, πτητικό έλαιο ολόκληρου του φυτού A. villosum, που περιέχει 15,03% α-πινένιο (Συμπληρωματικός Πίνακας S1), προφανώς αύξησε τη σχετική αφθονία των Proteobacteria σε 1,5 mg/mL και 3,0 mg/mL, γεγονός που υποδηλώνει ότι το α-πινένιο πιθανόν να ενεργεί ως μία από τις πηγές άνθρακα για τους μικροοργανισμούς του εδάφους.Οι πτητικές ενώσεις που παράγονται από διαφορετικά όργανα του A. villosum είχαν διάφορους βαθμούς αλλοπαθητικής δράσης στο L. sativa και το L. perenne, το οποίο σχετιζόταν στενά με τα χημικά συστατικά που περιείχαν τα μέρη του φυτού A. villosum. Αν και η χημική σύνθεση του πτητικού ελαίου επιβεβαιώθηκε, οι πτητικές ενώσεις που απελευθερώνονται από το A. villosum σε θερμοκρασία δωματίου είναι άγνωστες, οι οποίες χρήζουν περαιτέρω διερεύνησης. Επιπλέον, το συνεργιστικό αποτέλεσμα μεταξύ διαφορετικών αλληλοχημικών ουσιών αξίζει επίσης να ληφθεί υπόψη. Όσον αφορά τους μικροοργανισμούς του εδάφους, για να διερευνήσουμε πλήρως την επίδραση του πτητικού ελαίου στους μικροοργανισμούς του εδάφους, πρέπει ακόμα να διεξαγάγουμε πιο εμπεριστατωμένη έρευνα: να επεκτείνουμε τον χρόνο επεξεργασίας του πτητικού ελαίου και να διακρίνουμε τις διακυμάνσεις στη χημική σύνθεση του πτητικού ελαίου στο έδαφος σε διαφορετικές μέρες. -
Pure Artemisia capillaris λάδι για κεριά και σαπουνάδα κατασκευής χονδρικής αιθέριο έλαιο διάχυσης νέο για διαχυτήρες καυστήρα καλαμιών
Σχέδιο μοντέλου τρωκτικών
Τα ζώα χωρίστηκαν τυχαία σε πέντε ομάδες των δεκαπέντε ποντικών η καθεμία. Η ομάδα ελέγχου και τα ποντίκια της ομάδας μοντέλου υποβλήθηκαν σε καθετήρασησαμέλαιογια 6 ημέρες. Τα ποντίκια της ομάδας θετικού ελέγχου εισήχθησαν με δισκία διφενδάτη (ΒΤ, 10 mg/kg) για 6 ημέρες. Οι πειραματικές ομάδες υποβλήθηκαν σε αγωγή με 100 mg/kg και 50 mg/kg ΑΕΟ διαλυμένα σε σησαμέλαιο για 6 ημέρες. Την 6η ημέρα, η ομάδα ελέγχου υποβλήθηκε σε θεραπεία με σησαμέλαιο και όλες οι άλλες ομάδες υποβλήθηκαν σε θεραπεία με μία μόνο δόση 0,2% CCl4 σε σησαμέλαιο (10 ml/kg) μεενδοπεριτοναϊκή ένεση. Στη συνέχεια, τα ποντίκια νηστεύτηκαν χωρίς νερό και συλλέχθηκαν δείγματα αίματος από τα οπισθοβολβικά αγγεία. Το αίμα που συλλέχθηκε φυγοκεντρήθηκε στα 3000 ×gγια 10 λεπτά για να διαχωριστεί ο ορός.Εξάρθρημα του τραχήλου της μήτραςδιενεργήθηκε αμέσως μετά την απόσυρση του αίματος και τα δείγματα ήπατος αφαιρέθηκαν αμέσως. Ένα μέρος του δείγματος ήπατος αποθηκεύτηκε αμέσως στους -20 °C μέχρι την ανάλυση, και ένα άλλο μέρος αποκόπηκε και στερεώθηκε σε 10%φορμαλίνηδιάλυμα; οι υπόλοιποι ιστοί αποθηκεύτηκαν στους -80 °C για ιστοπαθολογική ανάλυση (Wang et al., 2008,Hsu et al., 2009,Nie et al., 2015).
Μέτρηση των βιοχημικών παραμέτρων στον ορό
Η ηπατική βλάβη εκτιμήθηκε με εκτίμηση τουενζυματικές δραστηριότητεςALT και AST ορού χρησιμοποιώντας τα αντίστοιχα κιτ του εμπορίου σύμφωνα με τις οδηγίες για τα κιτ (Nanjing, επαρχία Jiangsu, Κίνα). Οι ενζυματικές δραστηριότητες εκφράστηκαν ως μονάδες ανά λίτρο (U/l).
Μέτρηση MDA, SOD, GSH και GSH-Pxσε ομογενοποιήματα ήπατος
Οι ιστοί του ήπατος ομογενοποιήθηκαν με ψυχρό φυσιολογικό ορό σε αναλογία 1:9 (β/ο, ήπαρ:αλατόνερο). Τα ομογενοποιήματα φυγοκεντρήθηκαν (2500 χgγια 10 λεπτά) για τη συλλογή των υπερκειμένων για τους επόμενους προσδιορισμούς. Η ηπατική βλάβη εκτιμήθηκε σύμφωνα με τις ηπατικές μετρήσεις των επιπέδων MDA και GSH καθώς και των SOD και GSH-Pxδραστηριότητες. Όλα αυτά καθορίστηκαν ακολουθώντας τις οδηγίες στο κιτ (Nanjing, επαρχία Jiangsu, Κίνα). Τα αποτελέσματα για MDA και GSH εκφράστηκαν ως nmol ανά mg πρωτεΐνης (nmol/mg prot) και οι δραστηριότητες των SOD και GSH-Pxεκφράστηκαν ως U ανά mg πρωτεΐνης (U/mg πρωτ.).
Ιστοπαθολογική ανάλυση
Μέρη του πρόσφατα ληφθέντος ήπατος σταθεροποιήθηκαν σε ρυθμιστικό διάλυμα 10%.παραφορμαλδεΰδηδιάλυμα φωσφορικού. Το δείγμα στη συνέχεια ενσωματώθηκε σε παραφίνη, τεμαχίστηκε σε τμήματα 3-5 μm, χρωματίστηκε μεαιματοξυλίνηκαιηωσίνη(H&E) σύμφωνα με μια τυπική διαδικασία, και τελικά αναλύθηκε απόμικροσκοπία φωτός(Tian et al., 2012).
Στατιστική ανάλυση
Τα αποτελέσματα εκφράστηκαν ως η μέση ± τυπική απόκλιση (SD). Τα αποτελέσματα αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας το στατιστικό πρόγραμμα SPSS Statistics, έκδοση 19.0. Τα δεδομένα υποβλήθηκαν σε ανάλυση διασποράς (ANOVA,p< 0,05) ακολουθούμενο από το τεστ Dunnett και το τεστ Dunnett Τ3 για τον προσδιορισμό των στατιστικά σημαντικών διαφορών μεταξύ των τιμών των διαφόρων πειραματικών ομάδων. Μια σημαντική διαφορά θεωρήθηκε σε επίπεδοp< 0,05.
Αποτελέσματα και συζήτηση
Συστατικά του ΕΟΦ
Μετά από ανάλυση GC/MS, ο ΕΟΦ βρέθηκε να περιέχει 25 συστατικά που εκλούστηκαν από 10 έως 35 λεπτά και εντοπίστηκαν 21 συστατικά που αντιπροσωπεύουν το 84% του αιθέριου ελαίου (Πίνακας 1). Το πτητικό λάδι που περιείχεμονοτερπενοειδή(80,9%), σεσκιτερπενοειδή (9,5%), κορεσμένοι μη διακλαδισμένοι υδρογονάνθρακες (4,86%) και διάφορα ακετυλένιο (4,86%). Σε σύγκριση με άλλες μελέτες (Guo et al., 2004), βρήκαμε άφθονα μονοτερπενοειδή (80,90%) στον ΕΟΦ. Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι το πιο άφθονο συστατικό του ΑΕΟ είναι η β-κιτρονελλόλη (16,23%). Άλλα κύρια συστατικά του ΕΟΦ περιλαμβάνουν 1,8-κινεόλη (13,9%),κάμφορα(12,59%),λιναλοόλη(11,33%), α-πινένιο (7,21%), β-πινένιο (3,99%),θυμόλη(3,22%), καιμυρσένιο(2,02%). Η διακύμανση της χημικής σύνθεσης μπορεί να σχετίζεται με τις περιβαλλοντικές συνθήκες στις οποίες εκτέθηκε το φυτό, όπως μεταλλικό νερό, ηλιακό φως, στάδιο ανάπτυξης καιθρέψη.
-
Αγνό Saposhnikovia divaricata έλαιο για κεριά και σαπουνάδα κατασκευής χονδρικής αιθέριο έλαιο διάχυσης νέο για διαχυτές καυστήρα καλαμιών
2.1. Προετοιμασία ΣΔΕ
Τα ριζώματα του SD αγοράστηκαν ως αποξηραμένο βότανο από την Hanherb Co. (Guri, Κορέα). Τα φυτικά υλικά επιβεβαιώθηκαν ταξινομικά από τον Δρ Go-Ya Choi του Ινστιτούτου Ανατολικής Ιατρικής της Κορέας (KIOM). Ένα δείγμα κουπονιού (αριθμός 2014 SDE-6) κατατέθηκε στο Korean Herbarium of Standard Herbal Resources. Ξηρά ριζώματα SD (320 g) εκχυλίστηκαν δύο φορές με 70% αιθανόλη (με αναρροή 2 ωρών) και το εκχύλισμα στη συνέχεια συμπυκνώθηκε υπό μειωμένη πίεση. Το αφέψημα διηθήθηκε, λυοφιλίστηκε και αποθηκεύτηκε στους 4°C. Η απόδοση σε ξηρό εκχύλισμα από ακατέργαστα αρχικά υλικά ήταν 48,13% (β/β).
2.2. Ποσοτική Ανάλυση Υγρής Χρωματογραφίας Υψηλής Απόδοσης (HPLC).
Πραγματοποιήθηκε χρωματογραφική ανάλυση με σύστημα HPLC (Waters Co., Milford, ΜΑ, ΗΠΑ) και ανιχνευτή διάταξης φωτοδιόδου. Για την ανάλυση HPLC του SDE, το αρχικόO-Το πρότυπο glucosylcimifugin αγοράστηκε από το Korea Promotion Institute for Traditional Medicine Industry (Gyeongsan, Κορέα) καιδευτ-Ο-γλυκοζυλοαμουδόλη και 4'-O-β-D-γλυκοσυλ-5-O-Methylvisamminol απομονώθηκαν στο εργαστήριό μας και αναγνωρίστηκαν με φασματικές αναλύσεις, κυρίως με NMR και MS.
Δείγματα SDE (0,1 mg) διαλύθηκαν σε 70% αιθανόλη (10 mL). Ο χρωματογραφικός διαχωρισμός πραγματοποιήθηκε με στήλη XSelect HSS T3 C18 (4,6 × 250 mm, 5μm, Waters Co., Milford, MA, ΗΠΑ). Η κινητή φάση αποτελούνταν από ακετονιτρίλιο (Α) και 0,1% οξικό οξύ σε νερό (Β) με ρυθμό ροής 1,0 mL/min. Χρησιμοποιήθηκε ένα πρόγραμμα κλίσης πολλαπλών βημάτων ως εξής: 5% A (0 min), 5–20% A (0–10 min), 20% A (10–23 min) και 20–65% A (23–40 min ). Το μήκος κύματος ανίχνευσης σαρώθηκε στα 210-400 nm και καταγράφηκε στα 254 nm. Ο όγκος της ένεσης ήταν 10,0μΛ. Πρότυπα διαλύματα για τον προσδιορισμό τριών χρωμόνων παρασκευάστηκαν σε τελική συγκέντρωση 7,781 mg/mL (πρώτοO-glucosylcimifugin), 31,125 mg/mL (4'-O-β-D-γλυκοσυλ-5-O-methylvisamminol) και 31,125 mg/mL (δευτ-Ο-glucosylhamaudol) σε μεθανόλη και διατηρήθηκε στους 4°C.
2.3. Αξιολόγηση Αντιφλεγμονώδους ΔραστηριότηταςIn vitro
2.3.1. Κυτταρική καλλιέργεια και επεξεργασία δειγμάτων
Κύτταρα RAW 264.7 ελήφθησαν από την American Type Culture Collection (ATCC, Manassas, VA, USA) και αναπτύχθηκαν σε μέσο DMEM που περιείχε 1% αντιβιοτικά και 5.5% FBS. Τα κύτταρα επωάστηκαν σε υγρή ατμόσφαιρα 5% CO2 στους 37°C. Για τη διέγερση των κυττάρων, το μέσο αντικαταστάθηκε με φρέσκο μέσο DMEM και λιποπολυσακχαρίτη (LPS, Sigma-Aldrich Chemical Co., St. Louis, MO, USA) στο 1μg/mL προστέθηκε παρουσία ή απουσία SDE (200 ή 400μg/mL) για επιπλέον 24 ώρες.
2.3.2. Προσδιορισμός μονοξειδίου του αζώτου (ΝΟ), προσταγλανδίνης Ε2 (PGE2), παράγοντα νέκρωσης όγκου-α(TNF-α), και Παραγωγή Ιντερλευκίνης-6 (IL-6).
Τα κύτταρα υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με SDE και διεγέρθηκαν με LPS για 24 ώρες. Η παραγωγή ΝΟ αναλύθηκε με μέτρηση νιτρωδών αλάτων χρησιμοποιώντας το αντιδραστήριο Griess σύμφωνα με προηγούμενη μελέτη [12]. Έκκριση των φλεγμονωδών κυτοκινών PGE2, TNF-ακαι η IL-6 προσδιορίστηκε χρησιμοποιώντας κιτ ELISA (συστήματα Ε&Α) σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή. Τα αποτελέσματα του SDE στο ΝΟ και την παραγωγή κυτοκίνης προσδιορίστηκαν στα 540 nm ή 450 nm χρησιμοποιώντας ένα Wallac EnVision™συσκευή ανάγνωσης μικροπλακών (PerkinElmer).
2.4. Αξιολόγηση Δραστηριότητας ΑντιοστεοαρθρίτιδαςIn Vivo
2.4.1. Ζώα
Αρσενικοί αρουραίοι Sprague-Dawley (ηλικίας 7 εβδομάδων) αγοράστηκαν από την Samtako Inc. (Osan, Κορέα) και στεγάστηκαν υπό ελεγχόμενες συνθήκες με κύκλο φωτός/σκότους 12 ωρών στο°C και% υγρασία. Οι αρουραίοι έλαβαν εργαστηριακή δίαιτα και νερόad libitum. Όλες οι πειραματικές διαδικασίες πραγματοποιήθηκαν σε συμμόρφωση με τις οδηγίες των Εθνικών Ινστιτούτων Υγείας (NIH) και εγκρίθηκαν από την Επιτροπή Φροντίδας και Χρήσης Ζώων του πανεπιστημίου Daejeon (Daejeon, Δημοκρατία της Κορέας).
2.4.2. Επαγωγή ΟΑ με ΜΙΑ σε Αρουραίους
Τα ζώα τυχαιοποιήθηκαν και χωρίστηκαν σε ομάδες θεραπείας πριν από την έναρξη της μελέτης (ανά ομάδα). Διάλυμα MIA (3 mg/50μL φυσιολογικού ορού 0,9%) εγχύθηκε απευθείας στον ενδοαρθρικό χώρο του δεξιού γόνατος υπό αναισθησία που προκλήθηκε με ένα μείγμα κεταμίνης και ξυλαζίνης. Οι αρουραίοι χωρίστηκαν τυχαία σε τέσσερις ομάδες: (1) η ομάδα φυσιολογικού ορού χωρίς ένεση MIA, (2) η ομάδα MIA με ένεση MIA, (3) η ομάδα που έλαβε SDE (200 mg/kg) με ένεση MIA και (4 ) την ομάδα που υποβλήθηκε σε θεραπεία με ινδομεθακίνη (ΙΜ-) (2 mg/kg) με ένεση ΜΙΑ. Οι αρουραίοι χορηγήθηκαν από το στόμα με SDE και IM 1 εβδομάδα πριν από την ένεση MIA για 4 εβδομάδες. Η δοσολογία SDE και IM που χρησιμοποιήθηκε σε αυτή τη μελέτη βασίστηκε σε αυτές που χρησιμοποιήθηκαν σε προηγούμενες μελέτες [10,13,14].
2.4.3. Μετρήσεις της κατανομής που φέρει το βάρος του πίσω ποδιού
Μετά την επαγωγή της οστεοαρθρίτιδας, η αρχική ισορροπία στην ικανότητα αντοχής βάρους των οπίσθιων ποδιών διαταράχθηκε. Ένας ελεγκτής ανικανότητας (Linton instrumentation, Norfolk, UK) χρησιμοποιήθηκε για την αξιολόγηση των αλλαγών στην ανοχή στη μεταφορά βάρους. Οι αρουραίοι τοποθετήθηκαν προσεκτικά στον θάλαμο μέτρησης. Η φέρουσα δύναμη που ασκήθηκε από το οπίσθιο άκρο υπολογίστηκε κατά μέσο όρο σε περίοδο 3 δευτερολέπτων. Η αναλογία κατανομής βάρους υπολογίστηκε με την ακόλουθη εξίσωση: [βάρος στο δεξί οπίσθιο άκρο/(βάρος στο δεξί οπίσθιο άκρο + βάρος στο αριστερό οπίσθιο άκρο)] × 100 [15].
2.4.4. Μετρήσεις Επιπέδων Κυτοκίνης Ορού
Τα δείγματα αίματος φυγοκεντρήθηκαν στα 1.500 g για 10 λεπτά στους 4°C. Στη συνέχεια ο ορός συλλέχθηκε και αποθηκεύτηκε στους -70°C μέχρι τη χρήση. Τα επίπεδα της IL-1β, IL-6, TNF-ακαι η PGE2 στον ορό μετρήθηκαν χρησιμοποιώντας κιτ ELISA από την R&D Systems (Minneapolis, MN, USA) σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή.
2.4.5. Ποσοτική ανάλυση RT-PCR σε πραγματικό χρόνο
Το συνολικό RNA εξήχθη από τον ιστό της άρθρωσης του γόνατος χρησιμοποιώντας το αντιδραστήριο TRI (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA), μεταγράφηκε αντίστροφα σε cDNA και ενισχύθηκε με PCR χρησιμοποιώντας ένα κιτ TM One Step RT PCR με πράσινο SYBR (Applied Biosystems , Grand Island, Νέα Υόρκη, ΗΠΑ). Πραγματοποιήθηκε ποσοτική PCR σε πραγματικό χρόνο χρησιμοποιώντας το σύστημα PCR Real-Time της Applied Biosystems 7500 (Applied Biosystems, Grand Island, Νέα Υόρκη, ΗΠΑ). Οι αλληλουχίες εκκινητών και η αλληλουχία ανιχνευτή φαίνονται στον Πίνακα1. Δείγματα από δείγματα cDNA και ίση ποσότητα cDNA GAPDH ενισχύθηκαν με το κύριο μίγμα TaqMan® Universal PCR που περιέχει πολυμεράση DNA σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή (Applied Biosystems, Foster, CA, USA). Οι συνθήκες PCR ήταν 2 λεπτά στους 50°C, 10 λεπτά στους 94°C, 15 δευτερόλεπτα στους 95°C και 1 λεπτό στους 60°C για 40 κύκλους. Η συγκέντρωση του γονιδίου στόχου προσδιορίστηκε χρησιμοποιώντας τη συγκριτική μέθοδο Ct (αριθμός κύκλου κατωφλίου σε διασταύρωση μεταξύ γραφικής παράστασης ενίσχυσης και κατωφλίου), σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή.
