Καθαρό λάδι Saposhnikovia divaricata για κεριά και σαπωνοποιία χονδρικής αιθέριο έλαιο διαχύτη νέο για διαχύτες καυστήρων καλαμιών

σύντομη περιγραφή:

 

2.1. Προετοιμασία SDE

Τα ριζώματα του SD αγοράστηκαν ως αποξηραμένο βότανο από την Hanherb Co. (Guri, Κορέα). Τα φυτικά υλικά επιβεβαιώθηκαν ταξινομικά από τον Δρ. Go-Ya Choi του Κορεατικού Ινστιτούτου Ανατολικής Ιατρικής (KIOM). Ένα δείγμα κουπονιού (αριθμός 2014 SDE-6) κατατέθηκε στο Κορεατικό Βοτανικό Αρχείο Τυπικών Φυτικών Πόρων. Τα αποξηραμένα ριζώματα του SD (320 g) εκχυλίστηκαν δύο φορές με 70% αιθανόλη (με αναρροή 2 ωρών) και το εκχύλισμα στη συνέχεια συμπυκνώθηκε υπό μειωμένη πίεση. Το αφέψημα διηθήθηκε, λυοφιλοποιήθηκε και αποθηκεύτηκε στους 4°C. Η απόδοση του αποξηραμένου εκχυλίσματος από ακατέργαστα αρχικά υλικά ήταν 48,13% (β/β).

 

2.2. Ποσοτική Ανάλυση Υγρής Χρωματογραφίας Υψηλής Απόδοσης (HPLC)

Η χρωματογραφική ανάλυση πραγματοποιήθηκε με σύστημα HPLC (Waters Co., Milford, MA, ΗΠΑ) και ανιχνευτή συστοιχίας φωτοδιόδων. Για την ανάλυση HPLC του SDE, το πρωτεύονO-το πρότυπο γλυκοζυλοκιμιφουγίνης αγοράστηκε από το Κορεατικό Ινστιτούτο Προώθησης Βιομηχανίας Παραδοσιακής Ιατρικής (Gyeongsan, Κορέα) καιδευτ.-Ο-γλυκοζυλοχαμαυδόλη και 4'-O-β-D-γλυκοζυλ-5-OΗ μεθυλοβισαμμινόλη απομονώθηκε στο εργαστήριό μας και ταυτοποιήθηκε με φασματικές αναλύσεις, κυρίως με NMR και MS.

Δείγματα SDE (0,1 mg) διαλύθηκαν σε αιθανόλη 70% (10 mL). Ο χρωματογραφικός διαχωρισμός πραγματοποιήθηκε με στήλη XSelect HSS T3 C18 (4,6 × 250 mm, 5μm, Waters Co., Milford, MA, ΗΠΑ). Η κινητή φάση αποτελούνταν από ακετονιτρίλιο (Α) και 0,1% οξικό οξύ σε νερό (Β) με ρυθμό ροής 1,0 mL/min. Χρησιμοποιήθηκε ένα πρόγραμμα βαθμίδωσης πολλαπλών σταδίων ως εξής: 5% Α (0 λεπτά), 5–20% Α (0–10 λεπτά), 20% Α (10–23 λεπτά) και 20–65% Α (23–40 λεπτά). Το μήκος κύματος ανίχνευσης σαρώθηκε στα 210–400 nm και καταγράφηκε στα 254 nm. Ο όγκος έγχυσης ήταν 10,0μL. Παρασκευάστηκαν πρότυπα διαλύματα για τον προσδιορισμό τριών χρωμονών σε τελική συγκέντρωση 7,781 mg/mL (πρωτογενήςO-γλυκοζυλοκιμιφουγίνη), 31,125 mg/mL (4′-O-β-D-γλυκοζυλ-5-O-μεθυλοβισαμμινόλη), και 31,125 mg/mL (δευτ.-Ο-γλυκοζυλοχαμαυδόλη) σε μεθανόλη και διατηρείται στους 4°C.

2.3. Αξιολόγηση της αντιφλεγμονώδους δράσηςIn vitro

2.3.1. Κυτταροκαλλιέργεια και επεξεργασία δειγμάτων

Κύτταρα RAW 264.7 ελήφθησαν από την American Type Culture Collection (ATCC, Manassas, VA, ΗΠΑ) και αναπτύχθηκαν σε μέσο DMEM που περιείχε 1% αντιβιοτικά και 5,5% FBS. Τα κύτταρα επωάστηκαν σε υγροποιημένη ατμόσφαιρα 5% CO2 στους 37°C. Για την διέγερση των κυττάρων, το μέσο αντικαταστάθηκε με φρέσκο ​​μέσο DMEM και λιποπολυσακχαρίτη (LPS, Sigma-Aldrich Chemical Co., St. Louis, MO, ΗΠΑ) στους 1°C.μg/mL προστέθηκε παρουσία ή απουσία SDE (200 ή 400μg/mL) για επιπλέον 24 ώρες.

2.3.2. Προσδιορισμός Μονοξειδίου του αζώτου (NO), Προσταγλανδίνης E2 (PGE2), Παράγοντα Νέκρωσης Όγκωνα(TNF-α), και παραγωγή ιντερλευκίνης-6 (IL-6)

Τα κύτταρα υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με SDE και διεγέρθηκαν με LPS για 24 ώρες. Η παραγωγή NO αναλύθηκε μετρώντας τα νιτρώδη χρησιμοποιώντας το αντιδραστήριο Griess σύμφωνα με προηγούμενη μελέτη [12]. Έκκριση των φλεγμονωδών κυτοκινών PGE2, TNF-α, και η IL-6 προσδιορίστηκε χρησιμοποιώντας ένα κιτ ELISA (συστήματα R&D) σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή. Οι επιδράσεις του SDE στην παραγωγή NO και κυτοκινών προσδιορίστηκαν στα 540 nm ή 450 nm χρησιμοποιώντας ένα Wallac EnVision.™συσκευή ανάγνωσης μικροπλακών (PerkinElmer).

2.4. Αξιολόγηση της δράσης κατά της οστεοαρθρίτιδαςΕν ζωή

2.4.1. Ζώα

Αρσενικοί αρουραίοι Sprague-Dawley (7 εβδομάδων) αγοράστηκαν από την Samtako Inc. (Osan, Κορέα) και στεγάστηκαν υπό ελεγχόμενες συνθήκες με 12ωρο κύκλο φωτός/σκότους σε°C και% υγρασίας. Στους αρουραίους χορηγήθηκε εργαστηριακή διατροφή και νερό.κατά βούλησηΌλες οι πειραματικές διαδικασίες πραγματοποιήθηκαν σύμφωνα με τις κατευθυντήριες γραμμές των Εθνικών Ινστιτούτων Υγείας (NIH) και εγκρίθηκαν από την Επιτροπή Φροντίδας και Χρήσης Ζώων του πανεπιστημίου Daejeon (Daejeon, Δημοκρατία της Κορέας).

2.4.2. Πρόκληση οστεοαρθρίτιδας με μυοκαρδιοπάθεια (MIA) σε αρουραίους

Τα ζώα τυχαιοποιήθηκαν και κατανεμήθηκαν σε ομάδες θεραπείας πριν από την έναρξη της μελέτης (ανά ομάδα). Διάλυμα MIA (3 mg/50μ1 λίτρο φυσιολογικού ορού 0,9%) εγχύθηκε απευθείας στον ενδοαρθρικό χώρο του δεξιού γόνατος υπό αναισθησία που προκλήθηκε με μείγμα κεταμίνης και ξυλαζίνης. Οι αρουραίοι χωρίστηκαν τυχαία σε τέσσερις ομάδες: (1) την ομάδα φυσιολογικού ορού χωρίς ένεση MIA, (2) την ομάδα MIA με ένεση MIA, (3) την ομάδα που έλαβε SDE (200 mg/kg) με ένεση MIA και (4) την ομάδα που έλαβε ινδομεθακίνη (IM-) (2 mg/kg) με ένεση MIA. Στους αρουραίους χορηγήθηκε από το στόμα SDE και IM 1 εβδομάδα πριν από την ένεση MIA για 4 εβδομάδες. Η δοσολογία SDE και IM που χρησιμοποιήθηκε σε αυτή τη μελέτη βασίστηκε σε εκείνες που χρησιμοποιήθηκαν σε προηγούμενες μελέτες [10,13,14].

2.4.3. Μετρήσεις της Κατανομής Βάρους στο Οπίσθιο Πόδι

Μετά την επαγωγή οστεοαρθρίτιδας, η αρχική ισορροπία στην ικανότητα φόρτισης βάρους των πίσω ποδιών διαταράχθηκε. Χρησιμοποιήθηκε ένας δοκιμαστής ανικανότητας (Linton instrumentation, Norfolk, UK) για την αξιολόγηση των αλλαγών στην ανοχή φόρτισης βάρους. Οι αρουραίοι τοποθετήθηκαν προσεκτικά στον θάλαμο μέτρησης. Η δύναμη φόρτισης βάρους που ασκείται από το πίσω άκρο υπολογίστηκε κατά μέσο όρο σε διάστημα 3 δευτερολέπτων. Η αναλογία κατανομής βάρους υπολογίστηκε με την ακόλουθη εξίσωση: [βάρος στο δεξί πίσω άκρο/(βάρος στο δεξί πίσω άκρο + βάρος στο αριστερό πίσω άκρο)] × 100 [15].

2.4.4. Μετρήσεις των επιπέδων κυτοκινών στον ορό

Τα δείγματα αίματος φυγοκεντρήθηκαν στα 1.500 g για 10 λεπτά στους 4°C. Στη συνέχεια, ο ορός συλλέχθηκε και αποθηκεύτηκε στους -70°C μέχρι τη χρήση του. Τα επίπεδα της IL-1β, IL-6, TNF-α, και η PGE2 στον ορό μετρήθηκαν χρησιμοποιώντας κιτ ELISA από την R&D Systems (Minneapolis, MN, ΗΠΑ) σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή.

2.4.5. Ποσοτική ανάλυση RT-PCR σε πραγματικό χρόνο

Το συνολικό RNA εκχυλίστηκε από τον ιστό της άρθρωσης του γονάτου χρησιμοποιώντας το αντιδραστήριο TRI® (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, ΗΠΑ), μεταγράφηκε αντίστροφα σε cDNA και ενισχύθηκε με PCR χρησιμοποιώντας ένα κιτ TM One Step RT PCR με πράσινο SYBR (Applied Biosystems, Grand Island, NY, ΗΠΑ). Η ποσοτική PCR σε πραγματικό χρόνο πραγματοποιήθηκε χρησιμοποιώντας το σύστημα Applied Biosystems 7500 Real-Time PCR (Applied Biosystems, Grand Island, NY, ΗΠΑ). Οι αλληλουχίες εκκινητών και η αλληλουχία ανιχνευτή παρουσιάζονται στον Πίνακα.1Κλάσματα δείγματος cDNA και ίση ποσότητα cDNA GAPDH ενισχύθηκαν με το κύριο μείγμα TaqMan® Universal PCR που περιείχε DNA πολυμεράση σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή (Applied Biosystems, Foster, CA, ΗΠΑ). Οι συνθήκες PCR ήταν 2 λεπτά στους 50°C, 10 λεπτά στους 94°C, 15 δευτερόλεπτα στους 95°C και 1 λεπτό στους 60°C για 40 κύκλους. Η συγκέντρωση του γονιδίου-στόχου προσδιορίστηκε χρησιμοποιώντας τη συγκριτική μέθοδο Ct (αριθμός κύκλου κατωφλίου στο σημείο διασταύρωσης μεταξύ γραφήματος ενίσχυσης και κατωφλίου), σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή.

Τιμή FOB:0,5 $ ΗΠΑ - 9.999 / Τεμάχιο

Ελάχιστη ποσότητα παραγγελίας:100 τεμάχια/τεμάχια

Δυνατότητα εφοδιασμού:10000 τεμάχια/τεμάχια ανά μήνα