Αγνό Saposhnikovia divaricata έλαιο για κεριά και σαπουνάδα κατασκευής χονδρικής αιθέριο έλαιο διάχυσης νέο για διαχυτές καυστήρα καλαμιών

σύντομη περιγραφή:

 

2.1. Προετοιμασία ΣΔΕ

Τα ριζώματα του SD αγοράστηκαν ως αποξηραμένο βότανο από την Hanherb Co. (Guri, Κορέα). Τα φυτικά υλικά επιβεβαιώθηκαν ταξινομικά από τον Δρ Go-Ya Choi του Ινστιτούτου Ανατολικής Ιατρικής της Κορέας (KIOM). Ένα δείγμα κουπονιού (αριθμός 2014 SDE-6) κατατέθηκε στο Korean Herbarium of Standard Herbal Resources. Ξηρά ριζώματα SD (320 g) εκχυλίστηκαν δύο φορές με 70% αιθανόλη (με αναρροή 2 ωρών) και το εκχύλισμα στη συνέχεια συμπυκνώθηκε υπό μειωμένη πίεση. Το αφέψημα διηθήθηκε, λυοφιλίστηκε και αποθηκεύτηκε στους 4°C. Η απόδοση σε ξηρό εκχύλισμα από ακατέργαστα αρχικά υλικά ήταν 48,13% (β/β).

 

2.2. Ποσοτική Ανάλυση Υγρής Χρωματογραφίας Υψηλής Απόδοσης (HPLC).

Πραγματοποιήθηκε χρωματογραφική ανάλυση με σύστημα HPLC (Waters Co., Milford, ΜΑ, ΗΠΑ) και ανιχνευτή διάταξης φωτοδιόδου. Για την ανάλυση HPLC του SDE, το αρχικόO-Το πρότυπο glucosylcimifugin αγοράστηκε από το Korea Promotion Institute for Traditional Medicine Industry (Gyeongsan, Κορέα) καιδευτ-Ο-γλυκοζυλοαμουδόλη και 4'-O-β-D-γλυκοσυλ-5-O-Methylvisamminol απομονώθηκαν στο εργαστήριό μας και αναγνωρίστηκαν με φασματικές αναλύσεις, κυρίως με NMR και MS.

Δείγματα SDE (0,1 mg) διαλύθηκαν σε 70% αιθανόλη (10 mL). Ο χρωματογραφικός διαχωρισμός πραγματοποιήθηκε με στήλη XSelect HSS T3 C18 (4,6 × 250 mm, 5μm, Waters Co., Milford, MA, ΗΠΑ). Η κινητή φάση αποτελούνταν από ακετονιτρίλιο (Α) και 0,1% οξικό οξύ σε νερό (Β) με ρυθμό ροής 1,0 mL/min. Χρησιμοποιήθηκε ένα πρόγραμμα κλίσης πολλαπλών βημάτων ως εξής: 5% A (0 min), 5–20% A (0–10 min), 20% A (10–23 min) και 20–65% A (23–40 min ). Το μήκος κύματος ανίχνευσης σαρώθηκε στα 210-400 nm και καταγράφηκε στα 254 nm. Ο όγκος της ένεσης ήταν 10,0μΛ. Πρότυπα διαλύματα για τον προσδιορισμό τριών χρωμόνων παρασκευάστηκαν σε τελική συγκέντρωση 7,781 mg/mL (πρώτοO-glucosylcimifugin), 31,125 mg/mL (4'-O-β-D-γλυκοσυλ-5-O-methylvisamminol) και 31,125 mg/mL (δευτ-Ο-glucosylhamaudol) σε μεθανόλη και διατηρήθηκε στους 4°C.

2.3. Αξιολόγηση Αντιφλεγμονώδους ΔραστηριότηταςIn vitro

2.3.1. Κυτταρική καλλιέργεια και επεξεργασία δειγμάτων

Κύτταρα RAW 264.7 ελήφθησαν από την American Type Culture Collection (ATCC, Manassas, VA, USA) και αναπτύχθηκαν σε μέσο DMEM που περιείχε 1% αντιβιοτικά και 5.5% FBS. Τα κύτταρα επωάστηκαν σε υγρή ατμόσφαιρα 5% CO2 στους 37°C. Για τη διέγερση των κυττάρων, το μέσο αντικαταστάθηκε με φρέσκο ​​μέσο DMEM και λιποπολυσακχαρίτη (LPS, Sigma-Aldrich Chemical Co., St. Louis, MO, USA) στο 1μg/mL προστέθηκε παρουσία ή απουσία SDE (200 ή 400μg/mL) για επιπλέον 24 ώρες.

2.3.2. Προσδιορισμός μονοξειδίου του αζώτου (ΝΟ), προσταγλανδίνης Ε2 (PGE2), παράγοντα νέκρωσης όγκου-α(TNF-α), και Παραγωγή Ιντερλευκίνης-6 (IL-6).

Τα κύτταρα υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με SDE και διεγέρθηκαν με LPS για 24 ώρες. Η παραγωγή ΝΟ αναλύθηκε με μέτρηση νιτρωδών αλάτων χρησιμοποιώντας το αντιδραστήριο Griess σύμφωνα με προηγούμενη μελέτη [12]. Έκκριση των φλεγμονωδών κυτοκινών PGE2, TNF-ακαι η IL-6 προσδιορίστηκε χρησιμοποιώντας κιτ ELISA (συστήματα Ε&Α) σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή. Τα αποτελέσματα του SDE στο ΝΟ και την παραγωγή κυτοκίνης προσδιορίστηκαν στα 540 nm ή 450 nm χρησιμοποιώντας ένα Wallac EnVision™συσκευή ανάγνωσης μικροπλακών (PerkinElmer).

2.4. Αξιολόγηση Δραστηριότητας ΑντιοστεοαρθρίτιδαςIn Vivo

2.4.1. Ζώα

Αρσενικοί αρουραίοι Sprague-Dawley (ηλικίας 7 εβδομάδων) αγοράστηκαν από την Samtako Inc. (Osan, Κορέα) και στεγάστηκαν υπό ελεγχόμενες συνθήκες με κύκλο φωτός/σκότους 12 ωρών στο°C και% υγρασία. Οι αρουραίοι έλαβαν εργαστηριακή δίαιτα και νερόad libitum. Όλες οι πειραματικές διαδικασίες πραγματοποιήθηκαν σε συμμόρφωση με τις οδηγίες των Εθνικών Ινστιτούτων Υγείας (NIH) και εγκρίθηκαν από την Επιτροπή Φροντίδας και Χρήσης Ζώων του πανεπιστημίου Daejeon (Daejeon, Δημοκρατία της Κορέας).

2.4.2. Επαγωγή ΟΑ με ΜΙΑ σε Αρουραίους

Τα ζώα τυχαιοποιήθηκαν και χωρίστηκαν σε ομάδες θεραπείας πριν από την έναρξη της μελέτης (ανά ομάδα). Διάλυμα MIA (3 mg/50μL φυσιολογικού ορού 0,9%) εγχύθηκε απευθείας στον ενδοαρθρικό χώρο του δεξιού γόνατος υπό αναισθησία που προκλήθηκε με ένα μείγμα κεταμίνης και ξυλαζίνης. Οι αρουραίοι χωρίστηκαν τυχαία σε τέσσερις ομάδες: (1) η ομάδα φυσιολογικού ορού χωρίς ένεση MIA, (2) η ομάδα MIA με ένεση MIA, (3) η ομάδα που έλαβε SDE (200 mg/kg) με ένεση MIA και (4 ) την ομάδα που υποβλήθηκε σε θεραπεία με ινδομεθακίνη (ΙΜ-) (2 mg/kg) με ένεση ΜΙΑ. Οι αρουραίοι χορηγήθηκαν από το στόμα με SDE και IM 1 εβδομάδα πριν από την ένεση MIA για 4 εβδομάδες. Η δοσολογία SDE και IM που χρησιμοποιήθηκε σε αυτή τη μελέτη βασίστηκε σε αυτές που χρησιμοποιήθηκαν σε προηγούμενες μελέτες [10,13,14].

2.4.3. Μετρήσεις της κατανομής που φέρει το βάρος του πίσω ποδιού

Μετά την επαγωγή της οστεοαρθρίτιδας, η αρχική ισορροπία στην ικανότητα αντοχής βάρους των οπίσθιων ποδιών διαταράχθηκε. Ένας ελεγκτής ανικανότητας (Linton instrumentation, Norfolk, UK) χρησιμοποιήθηκε για την αξιολόγηση των αλλαγών στην ανοχή στη μεταφορά βάρους. Οι αρουραίοι τοποθετήθηκαν προσεκτικά στον θάλαμο μέτρησης. Η φέρουσα δύναμη που ασκήθηκε από το οπίσθιο άκρο υπολογίστηκε κατά μέσο όρο σε περίοδο 3 δευτερολέπτων. Η αναλογία κατανομής βάρους υπολογίστηκε με την ακόλουθη εξίσωση: [βάρος στο δεξί οπίσθιο άκρο/(βάρος στο δεξί οπίσθιο άκρο + βάρος στο αριστερό οπίσθιο άκρο)] × 100 [15].

2.4.4. Μετρήσεις Επιπέδων Κυτοκίνης Ορού

Τα δείγματα αίματος φυγοκεντρήθηκαν στα 1.500 g για 10 λεπτά στους 4°C. Στη συνέχεια ο ορός συλλέχθηκε και αποθηκεύτηκε στους -70°C μέχρι τη χρήση. Τα επίπεδα της IL-1β, IL-6, TNF-ακαι η PGE2 στον ορό μετρήθηκαν χρησιμοποιώντας κιτ ELISA από την R&D Systems (Minneapolis, MN, USA) σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή.

2.4.5. Ποσοτική ανάλυση RT-PCR σε πραγματικό χρόνο

Το συνολικό RNA εξήχθη από τον ιστό της άρθρωσης του γόνατος χρησιμοποιώντας το αντιδραστήριο TRI (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA), μεταγράφηκε αντίστροφα σε cDNA και ενισχύθηκε με PCR χρησιμοποιώντας ένα κιτ TM One Step RT PCR με πράσινο SYBR (Applied Biosystems , Grand Island, Νέα Υόρκη, ΗΠΑ). Πραγματοποιήθηκε ποσοτική PCR σε πραγματικό χρόνο χρησιμοποιώντας το σύστημα PCR Real-Time της Applied Biosystems 7500 (Applied Biosystems, Grand Island, Νέα Υόρκη, ΗΠΑ). Οι αλληλουχίες εκκινητών και η αλληλουχία ανιχνευτή φαίνονται στον Πίνακα1. Δείγματα από δείγματα cDNA και ίση ποσότητα cDNA GAPDH ενισχύθηκαν με το κύριο μίγμα TaqMan® Universal PCR που περιέχει πολυμεράση DNA σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή (Applied Biosystems, Foster, CA, USA). Οι συνθήκες PCR ήταν 2 λεπτά στους 50°C, 10 λεπτά στους 94°C, 15 δευτερόλεπτα στους 95°C και 1 λεπτό στους 60°C για 40 κύκλους. Η συγκέντρωση του γονιδίου στόχου προσδιορίστηκε χρησιμοποιώντας τη συγκριτική μέθοδο Ct (αριθμός κύκλου κατωφλίου σε διασταύρωση μεταξύ γραφικής παράστασης ενίσχυσης και κατωφλίου), σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή.

Τιμή FOB:0,5 $ - 9.999 $ / Τεμάχιο

Ελάχιστη ποσότητα παραγγελίας:100 Τεμάχια/Τεμάχια

Δυνατότητα προμήθειας:10000 Τεμάχιο/Τεμάχια ανά μήνα